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qPCR定量の精度 トピック削除
No.10384-TOPIC - 2022/04/07 (木) 16:54:29 - おお


皆さんの実際のデーターであるコンディションの細胞からRTqPCRをしたとき、独立した実験を繰り返したときddCTとかどれくらいのSDになりますか。またテクニカルTriplicate(同じコンディションの細胞を複数のDish(Well)した)ときdCTのSDはどれくらいになってますでしょうか。

参考にさせてもらえば幸いです。ぶっちゃけ差としてどれくらいまで検出可能でしょうか。1.5倍ぐらいは楽勝でしょうか(生理的に意味があるかどうかは置いといて)。
 
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No.10384-5 - 2022/04/16 (土) 01:14:44 - おお
>[Re:4] wwさんは書きました :

> ただ、私が扱っている系では、Test群で発現量の変化がせいぜい1.5-3倍程度しかないためかもしれません。

ありがとうございます。1.5ならなんとか差が見れるって感じですかね。

> 別スレでも議論されているようにCt値が33や35を越えてくると、当然SDは増大しますね。

そうですね。そのへんのサイクルになるとチューブに1コピーとか2コピーというレベルに近づいてきますので、Well間でCtが1違ってもおかしくない状況ですよね。

(無題) 削除/引用
No.10384-4 - 2022/04/15 (金) 22:00:54 - ww
>[Re:3] おおさんは書きました :
> 実際ControlとTestの比較をしたとき、ControlはSD0.2程度で収まるけどTestの数字は少しバラけるとかないですか?

Control=対照群、Test=刺激等の介入群と理解しましたが、
群によって変わる傾向はなかったと思います。
ただ、私が扱っている系では、Test群で発現量の変化がせいぜい1.5-3倍程度しかないためかもしれません。

また、先程示した数字はCt<30未満くらいの理想的に定量ができる範囲の結果で、
別スレでも議論されているようにCt値が33や35を越えてくると、当然SDは増大しますね。

(無題) 削除/引用
No.10384-3 - 2022/04/15 (金) 10:45:31 - おお
>[Re:2] wwさんは書きました :

> 0.1-0.5くらい。ただし、内在性コントロールで補正すると最大でも0.2程度
>
> こんなところです。

ありがとうございます0.2は精度が高いですね。統計的にただしいかはおいておいてCIで0.4としてこれが重ならないようにするなら平均で0.8の差がないと確実な有意差が出にくいのかもしれませんね。1.75倍ぐらいの発現量の差は確実にみれるだろうって感じでしょうかね。

実際ControlとTestの比較をしたとき、ControlはSD0.2程度で収まるけどTestの数字は少しバラけるとかないですか?

(無題) 削除/引用
No.10384-2 - 2022/04/15 (金) 09:29:06 - ww
これ私も興味があるので遅まきながら

きちんと統計とって確かめてはいませんが
独立した実験のSD
0.1-0.2程度(になるようプライマー毎に最適化した条件でrunしている)

Technical triplicateのSD
0.1-0.5くらい。ただし、内在性コントロールで補正すると最大でも0.2程度

こんなところです。

qPCR定量の精度 削除/引用
No.10384-1 - 2022/04/07 (木) 16:54:29 - おお


皆さんの実際のデーターであるコンディションの細胞からRTqPCRをしたとき、独立した実験を繰り返したときddCTとかどれくらいのSDになりますか。またテクニカルTriplicate(同じコンディションの細胞を複数のDish(Well)した)ときdCTのSDはどれくらいになってますでしょうか。

参考にさせてもらえば幸いです。ぶっちゃけ差としてどれくらいまで検出可能でしょうか。1.5倍ぐらいは楽勝でしょうか(生理的に意味があるかどうかは置いといて)。

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