Bio Technical フォーラム

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TUNEL染色で細胞質もうすく染まる トピック削除
No.10336-TOPIC - 2022/03/14 (月) 12:38:12 - ertymk
傷害を受けた臓器の組織切片のTUNEL染色をしました。検出はDABで行いました。核が濃く染まる細胞がまばらに見られますが、これらの細胞をよく見ると細胞質も薄く染まっています。negative controlおよび健康な動物の組織では何も染まりません。TUNEL法では核のみが染まると思うのですが細胞質も弱く染まることがあるのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.10336-3 - 2022/03/14 (月) 17:30:44 - ertymk
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.10336-2 - 2022/03/14 (月) 14:11:49 - G25
酵素標識を反応産物で染色する場合、反応産物が生じてから沈着するまでにラグがあって、in situで沈着する前に反応産物が拡散してにじむ場合があります。そのせいだと思います。

反応を緩やかにしてやればある程度、防げます。
過酸化水素の濃度をうんと下げて、ゆっくり発色するとか、過酸化水素を使わずに酵素的に過酸化物を生じさせる方法(たとえばグルコースとグルコースオキシダーゼとか)にするとか。

また、DABの単独の発色(褐色)だけでなくコバルト、ニッケルなどのエンハンサー(青黒色)を使っていると、にじみやすいように思います。

TUNEL染色で細胞質もうすく染まる 削除/引用
No.10336-1 - 2022/03/14 (月) 12:38:12 - ertymk
傷害を受けた臓器の組織切片のTUNEL染色をしました。検出はDABで行いました。核が濃く染まる細胞がまばらに見られますが、これらの細胞をよく見ると細胞質も薄く染まっています。negative controlおよび健康な動物の組織では何も染まりません。TUNEL法では核のみが染まると思うのですが細胞質も弱く染まることがあるのでしょうか。

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