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SH-SY5Yへのいいtransfection reagentはありますか？ トピック削除
No.10309-TOPIC - 2022/03/02 (水) 22:11:49 - kent
お世話になります
現在SH-SY5Yを使って過剰発現しようとしているのですが、非常にtransfection効率が悪くて困っています。
以下の5つのtransfectionを試してみました。
Lipofectamine 2000, Lipofectamine 3000, FugeneHD, Fugene6, Mirus TransIT pro.
一番良かったのはTransITproですが、それでもGFPで見る限り5％以下です。
weseternもしてみましたが、ラボで汎用している抗体を使っても全く検出されていません。
HEK293ではもちろんどれも＞80％以上の効率でした。
ATCCでGeneXPlusがSH-SY5Yに対して40％もの効率とあるのですが、referenceやreviewが見当たらず、購入を躊躇しております。
electroporationやlentiはで実験の都合上できれば避けたいです。
どなたかおすすめの試薬がありましたらぜひ教えてください。
　
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培地交換 削除/引用
No.10309-6 - 2022/07/05 (火) 18:36:06 - Taro Okada
だいぶ遅くなってしまったので目に留まるかどうかわかりませんが・・・。

SH-SY5Y細胞へのトランスフェクトは日常的にやっています。
もしトランスフェクト前の培地交換をしていなければ，やってみてください。

トランスフェクト直前に10%血清を含む培地（僕はDMEM/F-12と血清をフレッシュに混ぜたものを使っています）で置き換えるだけです。その後Furene HD（Lipofectamine2000/3000でもやったことがあります）でトランスフェクトします。

HeLa細胞などではあまり培地交換の影響はないのですが，SH-SY5Yでは直前の培地交換によって劇的にトランスフェクト効率が上がり，簡単に３０％以上の効率となります。

(無題) 削除/引用
No.10309-5 - 2022/03/04 (金) 20:30:15 - kent
AAさん、

これは初めて知りました。
Sendai virusのenvelopを使ったシステムのようで大変興味があります。
より調べてみます。
情報ありがとうございます。


>[Re:4] AAさんは書きました :
> SY5Yではないですが、GenomONEは初代培養神経/アストロサイトでかなりよく入りました。

(無題) 削除/引用
No.10309-4 - 2022/03/04 (金) 13:07:43 - AA
SY5Yではないですが、GenomONEは初代培養神経/アストロサイトでかなりよく入りました。

(無題) 削除/引用
No.10309-3 - 2022/03/03 (木) 22:47:35 - kent
おおさん、

ご指摘ありがとうございます。
たしかに細胞の状態なども考慮に入れる必要があるのかもしれません。
マイコプラズマは確認済みですが、培養中にある程度分化している可能性もありますので、あらたにおこしてみます。
lipofection以外の方法を試してみたいと思っていましたので、リン酸カルシウムを試してみます。
ありがとうございます。


>[Re:2] おおさんは書きました :
> Lipofectamine 2000やFugene6で結構はいっていましたが、、、
>
> effectene も結構良かった印象があります
>
> www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/functional-and-cell-analysis/transfection/effectene-transfection-reagent/?cmpid=PC_DA_NON_BioCompare-ProductListing_0320_RD_MarketPlace
>
> それかリン酸カルシウム法でやってみます？
> www.takarabio.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/calcium-phosphate-transfection-of-neurons
> www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/caphos
>
> DNAや細胞の生理状態もちょっと気になるところですが、、、

(無題) 削除/引用
No.10309-2 - 2022/03/03 (木) 04:17:43 - おお
Lipofectamine 2000やFugene6で結構はいっていましたが、、、

effectene も結構良かった印象があります

www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/functional-and-cell-analysis/transfection/effectene-transfection-reagent/?cmpid=PC_DA_NON_BioCompare-ProductListing_0320_RD_MarketPlace

それかリン酸カルシウム法でやってみます？
www.takarabio.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/calcium-phosphate-transfection-of-neurons
www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/caphos

DNAや細胞の生理状態もちょっと気になるところですが、、、

SH-SY5Yへのいいtransfection reagentはありますか？ 削除/引用
No.10309-1 - 2022/03/02 (水) 22:11:49 - kent
お世話になります
現在SH-SY5Yを使って過剰発現しようとしているのですが、非常にtransfection効率が悪くて困っています。
以下の5つのtransfectionを試してみました。
Lipofectamine 2000, Lipofectamine 3000, FugeneHD, Fugene6, Mirus TransIT pro.
一番良かったのはTransITproですが、それでもGFPで見る限り5％以下です。
weseternもしてみましたが、ラボで汎用している抗体を使っても全く検出されていません。
HEK293ではもちろんどれも＞80％以上の効率でした。
ATCCでGeneXPlusがSH-SY5Yに対して40％もの効率とあるのですが、referenceやreviewが見当たらず、購入を躊躇しております。
electroporationやlentiはで実験の都合上できれば避けたいです。
どなたかおすすめの試薬がありましたらぜひ教えてください。
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