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細胞の凍結ストックからタンパク質を抽出し、様々な実験に用いる
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No.10300-TOPIC - 2022/03/01 (火) 00:31:49 - いま
血液サンプルを扱うため、実験機会が限られています。
FACSを行い、細胞を分離し、チューブに分けて液体窒素で保管する予定です。
凍結ストックからタンパク質を抽出し、様々な実験に用いたいのですが、凍結保存してもタンパク質は大きな変性や分解なく機能するものなのでしょうか?
凍結保存した細胞をRIPA等のバッファーに溶解して、pull downを行ったり、タンパク質抽出し、その後機能解析を行いたいです。
周りに同様の実験をしている人がいないため、アドバイスいただけないでしょうか。
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No.10300-2 - 2022/03/01 (火) 01:21:41 - ふらいむ
一般論として、FACSでソートするような量の細胞から、
機能解析に用いる量のタンパク質を精製するのは難しいと思います。
大腸菌等に目的のタンパク質を発現させて、
精製後に各種アッセイに用いればよいのではないでしょうか。
細胞の凍結ストックからタンパク質を抽出し、様々な実験に用いる
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No.10300-1 - 2022/03/01 (火) 00:31:49 - いま
血液サンプルを扱うため、実験機会が限られています。
FACSを行い、細胞を分離し、チューブに分けて液体窒素で保管する予定です。
凍結ストックからタンパク質を抽出し、様々な実験に用いたいのですが、凍結保存してもタンパク質は大きな変性や分解なく機能するものなのでしょうか?
凍結保存した細胞をRIPA等のバッファーに溶解して、pull downを行ったり、タンパク質抽出し、その後機能解析を行いたいです。
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