>[Re:10] Cellさんは書きました :
> 最初は脾臓を潰しすぎていて、細胞集団がでず、ごみばかりになって
> しまったので、改善して細胞集団はでるようになりました。
> PBSは、PBS（-）で同じものを使っていますが、何かｐｈを変える要因があったか確認してみます！
PBSは粉から自作ですか？1xや10xを購入して使っているのであればほぼ問題ないと思います。
> CD4,8は+で、CD3はでるはずなのに出ないのです。
> まして一緒におこなった技術さんのはでるのです。
> ちなみに、私の細胞集団は、うっすらで技術さんのはキレイに陽陰分かれています。ネガティブコントロールをとるということは、IsoTypeですよね。行いました。
ここが一番重要です！
「私の細胞集団は、うっすらで技術さんのはキレイに陽陰分かれています。」
つまり、技術さんのやった手順とあなたの手順が違うということですね。ここが原因だと思いますよ。
>[Re:9] Cellさんは書きました :
> >[Re:3] iiiiさんは書きました :
> > サイトメトリーの検出のセットはうまくできていますか？ボルテージが高すぎたり低すぎたり、ログスケールなのかリニアーなのかとか。
>
> この点をもう少し詳しく教えて頂けますか？
サイトメトリーに細胞を流して、パソコン画面上で検出結果を見ますよね。それはドットプロットかヒストグラムか？その縦軸横軸はログスケールで見ているのかリニアースケールでみているか？ということです。たぶん最初にFSCとSSCを出すときはリニアー、蛍光検出はログ、だったかな？しばらくサイトメトリーやってないのでちょっと覚えていませんが、技術さんに聞いたらわかると思います。一度サンプルを流しながら検出の画面をいろいろといじるといいと思いますよ。案外ボルテージが高すぎ低過ぎで細胞集団が画面の外に出ていた、なんてこともあるかもしれません。
> FCBlockや抗体がよく洗浄されているかどうかは値に影響しますか？
> 洗浄がたりなかったのでしょうか？
技術さんがきれいにでているのであれば、その方法で問題ないのでしょう。
> >[Re:4] iiiiさんは書きました :
> > 染色はCD3とF4/80の2色？それで先生からはオッケー出たのですか？
> CD3,F4/80の他に、最初は、CD4,CD8,CD86,CD11も測定しました。
> その時にCD4,8,11は出たのですが、CD3,F4/80,CD86がでなかった為、
> ひとまず、一番簡単なCD3,F4/80だけ染めてみることになった経過が
> あります。
なるほど。とにかく技術さんは出ているとのことですから、同じようにやってみれば出るはずです。同じようにやってみてください。
ちなみに自身の経験で、まれに変な結果が出て？？となったときもありましたがそれは技術さんに「たまたま運が悪かったんだよ、そのときのデータは諦めて別のデータをとったほうがいいよ」というときもありました。きっと次は出ますよ、頑張ってね。 |
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