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(無題) 削除/引用 No.1029-8 - 2012/10/23 (火) 16:52:03 - 荒い 返信が遅くなりましたが、皆様の素晴らしいアドバイス、ありがとうございました。 今後の参考にさせて頂きます。

(無題) 削除/引用 No.1029-7 - 2012/10/19 (金) 09:13:14 - mon > ちなみに、monさんのご回答で、DNA濃度が高い時は切れないときがあると > 書かれてますが、だいたいどれくらいの濃度のことを仰ってるのでしょうか？ 20ug/50ul (0.4mg/ml)くらいです（手抜き実験ですが...）。Miniprepしたplasmid(RNase処理済み）をEtOH沈等で濃縮した時もMgを添加しないと不十分な切断になることがありました。

(無題) 削除/引用 No.1029-6 - 2012/10/18 (木) 20:41:59 - Harmonia うちは10T-0.1Eと呼んでいました。

(無題) 削除/引用 No.1029-5 - 2012/10/18 (木) 17:24:49 - ~ 蛇足というか主題とは外れるかもしれませんが、 長期保存しないことが自分でわかっているDNAについては、 TEのEDTAを10分の1量で作製したものを用いることがあります。 0.1x TEとか、T0.1Eとか呼んでますが。

(無題) 削除/引用 No.1029-4 - 2012/10/17 (水) 18:35:26 - 荒い これはとても勉強になりました！ Mgの濃度は今まで気にしていませんでした・・・。 TEでゲノムを溶かしても、制限酵素反応には問題ないみたいですね。 ちなみに、monさんのご回答で、DNA濃度が高い時は切れないときがあると 書かれてますが、だいたいどれくらいの濃度のことを仰ってるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1029-3 - 2012/10/17 (水) 18:26:40 - AP ふつうは、普通は反応液全体に占めるDNA溶液量は少ない（例えば1/10とか）で、TEも希釈されますから全然大丈夫です。 右も左もよくわからないビギナーの頃、しばらくの間ずっと水の代わりにTEで反応液を調製していましたが、ちゃんと切れていたため、なかなか間違いに気が付きませんでしたよ。TEのEDTAは1 mMなのに対し、制限酵素消化バッファー中のMg++はたいがい10 mMですから、EDTAはほとんど無力でしょう。

(無題) 削除/引用 No.1029-2 - 2012/10/17 (水) 17:24:41 - mon 制限酵素bufferを加えた後の最終的なMg濃度が5mMほどあれば大丈夫です。 ただし、DNA濃度が高いときは（DNAのリン酸基がMgをキレートするためか？）切断されないときがあります。この場合、別途Mgを添加すれば大抵OKです(20mMくらい、多すぎても問題ないようです）。 EDTAが入っていないとDNAの長期保存には不安が残りますね。

TE bufferと制限酵素 削除/引用 No.1029-1 - 2012/10/17 (水) 17:12:14 - 荒い DNA(ゲノム)の保存方法と制限酵素について、質問させて下さい。 抽出したゲノムを保存する場合、一般的にはTE bufferがよく使われますが、このbufferに溶かしたDNAを制限酵素で切る場合、TEが入っててもちゃんと切れるのでしょうか？ TEによって制限酵素の活性が下がったりしないのでしょうか？ この活性が下がるのが怖くて、ゲノムをDWに溶かして保存したりしてましたが、実際のところどうなのでしょうか？

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