Bio Technical フォーラム

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PCRのプレミックス トピック削除
No.10284-TOPIC - 2022/02/24 (木) 00:53:24 - もも
PCR酵素(プレミックス)を購入したのですが、マイナス20度に保存してると凍結しました。酵素ってグリセロール含んで凍結しないようにしてるのが普通だと思ってましたが、そうではないのでしょうか?
あとプレミックスを融解しても粒状のものが沈殿してます。マグネシウムの塩か何かかなと思いますが、こういうのは吸わずに上清を使用すると思ってよろしいでしょうか?
 
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No.10284-9 - 2022/02/24 (木) 21:48:57 - もも
おお様
確認したつもりでしたが、、、載っていましたか、、失礼しました、ありがとうございます。
てて様
20回以上は軽く使用するので少し気になりますが、確かに多少活性落ちても問題ない実験ではあります。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.10284-8 - 2022/02/24 (木) 11:33:49 - てて
TakaraのPrimeStar MAXを使ってるけどこれも普通に凍りますね
何回かは凍結融解大丈夫ってメーカーがうたってるだけあってかなりの回数凍結融解してますが、使えなくなるまで活性が落ちた経験はないです
用途的に増えてくれれば良いという用途でしか使ってないので、少々活性が落ちたところで増えるから別に良いとして使ってるところが多いんじゃないかなと思います
気になるのであれば小分注しておけば良いのではないでしょうか

(無題) 削除/引用
No.10284-7 - 2022/02/24 (木) 10:35:52 - おお
Please Note: A precipitate (most noticeable
after the first 1–2 freeze/thaw cycles) is not
uncommon. To ensure optimal performance, the
master mix should be thawed and resuspended
prior to use. Stability testing using up to 20 freeze/
thaw cycles has shown no negative effect on
master mix performance.

https://www.neb.com/-/media/catalog/datacards-or-manuals/m0492datasheet-lot0021207.pdf?rev=efe4815ef3324a478c5254dc2cff0183&hash=FD87C1D4B668D141FFBD8B6F38854789

読んだ?
凍るけど20回ぐらいの凍結、融解は大丈夫と書いてるよ。気持ち悪かったら数回分づつ分注してもいいのかもしれないね。

(無題) 削除/引用
No.10284-6 - 2022/02/24 (木) 09:56:45 - もも
失礼しました。沈殿のことは書いてました。
biolabのQ5 High-Fidelity 2X Master Mixになります。
毎回凍結融解繰り返して使用するのが少し気になってますが、このような場合小分けに分注したほうがよいでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.10284-4 - 2022/02/24 (木) 09:04:03 - noname
プレミックスの酵素だと2xの物とかでしょうか?
2xの物は凍りますよ。
あと沈殿物ですが、マニュアルに、沈殿が出た場合はこうしてくださいとトラブルシューティングが載っていると思います。

(無題) 削除/引用
No.10284-3 - 2022/02/24 (木) 08:33:13 - TS
商品名を開示してはどうですか。その方が具体的にわかるし、もしかすると冷凍庫の問題かもしれません。

安物の冷凍庫に入れているせいかもしれませんが、うちの冷凍庫では2XくらいのマスターミックスになっているようなPCR酵素はよく凍っています。アジレントのBrilliant IIIです。

(無題) 削除/引用
No.10284-2 - 2022/02/24 (木) 07:13:32 - おお
そういう商品を買ったらマニュアルというかInstructionというかついてこないですか?
少なくとも商品名を開示してもらわないと、商品によって違っていたら問題の解決に至らないかもしれません。
それ以前にメーカーなどに問い合わせするのが普通ではないかと思いますが、、、

>あとプレミックスを融解しても粒状のものが沈殿してます。
ベタインなどが入っているかもしれませんけど、商品すらわからないのだから答えられません。。。

PCRのプレミックス 削除/引用
No.10284-1 - 2022/02/24 (木) 00:53:24 - もも
PCR酵素(プレミックス)を購入したのですが、マイナス20度に保存してると凍結しました。酵素ってグリセロール含んで凍結しないようにしてるのが普通だと思ってましたが、そうではないのでしょうか?
あとプレミックスを融解しても粒状のものが沈殿してます。マグネシウムの塩か何かかなと思いますが、こういうのは吸わずに上清を使用すると思ってよろしいでしょうか?

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