Bio Technical フォーラム

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ヒトiPS細胞のEDTA剥離 トピック削除
No.10268-TOPIC - 2022/02/19 (土) 02:01:32 - けてーん
よろしくおねがいします。
マトリクソームのプロトコルに従って、
StemFitとLaminin511E8で培養中のヒトiPS細胞を
5mM EDTA/PBSで剥がして継代しています。

殆どの株は問題なく剥がせるのですが、
1株だけどうしても接着が強すぎて剥がれない株があります。
EDTA処理時間、濃度、511E8コート条件の変更の他に
検討できる点はありますか？
皆様のご経験を聞かせていただけるとありがたいです。
　
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(無題) 削除/引用
No.10268-3 - 2022/02/25 (金) 18:53:40 - KY
私はコロニーに格子状の傷をつけて、その一部を継代していました。

(無題) 削除/引用
No.10268-2 - 2022/02/22 (火) 09:11:12 - 匿名
CiRAで公開しているプロトコールでは、0.5x TrypLEを用いているので試してみてはいかがでしょうか？
www.cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/hipsprotocolFf_140311.pdf

また、Accutaseを使用しているプロトコールもあるかと思います。

ヒトiPS細胞のEDTA剥離 削除/引用
No.10268-1 - 2022/02/19 (土) 02:01:32 - けてーん
よろしくおねがいします。
マトリクソームのプロトコルに従って、
StemFitとLaminin511E8で培養中のヒトiPS細胞を
5mM EDTA/PBSで剥がして継代しています。

殆どの株は問題なく剥がせるのですが、
1株だけどうしても接着が強すぎて剥がれない株があります。
EDTA処理時間、濃度、511E8コート条件の変更の他に
検討できる点はありますか？
皆様のご経験を聞かせていただけるとありがたいです。
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