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(無題) 削除/引用 No.10267-9 - 2022/02/28 (月) 13:02:55 - G25 原核生物ゲノムから21 kbオペロンまるっと増やそうとしたけれどだめで、 オーバーラップをとって前半後半11 kb に分けて増やして、制限酵素的につなげてクローニングした。使用酵素はKOD FX neo。並行してKOD plus v.2もためしたが不首尾。

(無題) 削除/引用 No.10267-8 - 2022/02/28 (月) 11:34:00 - AA 酵素を売ってる会社のウェブサイトに行くと実施例があったりしますね。 下記はタカラの例です。 ttps://catalog.takara-bio.co.jp/com/tech_info_detail.php?mode=3&masterid=M100007575&unitid=U100009517

(無題) 削除/引用 No.10267-7 - 2022/02/27 (日) 15:16:28 - おお どこかで何キロまで増やせたとか自慢話をしてないかと探し中

(無題) 削除/引用 No.10267-6 - 2022/02/26 (土) 22:15:52 - み 昔はLA Taqで8k産物をRT-PCRで増幅クローニングして変異ゼロだった。 今はKOD Fxで12kをRT-PCRで増幅できた。

(無題) 削除/引用 No.10267-5 - 2022/02/26 (土) 21:05:49 - qq 全くmutationが入っていなかったのはPCRのdirect-sequenceだったりしない？ それとも、個別のシングルクローンをsequenceしたのかなぁ？

(無題) 削除/引用 No.10267-4 - 2022/02/26 (土) 17:30:47 - 鬼 私も組み換えベクターを作ってたころはtakaraのprimestar maxを使ってました 10Kb近いものを増やしてましたが、全くmutationが入っておらず正確性も高かったです

(無題) 削除/引用 No.10267-3 - 2022/02/26 (土) 09:08:30 - mp KOD系はあまりいい印象はないです。takaraのPSmaxなら12kbくらいは普通に増えました（鋳型はプラスミドですが）。

(無題) 削除/引用 No.10267-2 - 2022/02/25 (金) 18:52:44 - KY 各メーカーからパンフが出てると思うのでそれを参考にされたらよいかと。 KOD-Fx-Neoって14 kbはいけるかなぁ。。。extention Timeだけでも相当長く設定しないとですね。 今では数秒でkb extensionするものもありますよね。

【PCR】どんな酵素で最大何kb増やせましたか？ 削除/引用 No.10267-1 - 2022/02/18 (金) 23:27:26 - 沼 素朴な質問です。 皆さんはこれまでにどんな酵素を使って最大何kbの産物を増やせましたか？ 私は今日ゲノムDNAをテンプレートにして、KOD FX Neoで14kbのターゲットを増やそうとしましたがやっぱりダメでした。 なのでゲノムを2分割で増やす方法を考えましたが、手元にあるプライマーでは14kbを10kbと4kbに分割して増やす方法がやっとなので明日チャレンジしますが いくら14kbより短くなってるとはいえ、10kb増えるかなぁと疑問です。 今後の参考にもしたいので、みなさんがどんな酵素で何kb増やせたのか、よろしければ教えて下さい。

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