BioTechnicalフォーラム [脳表面へのAAVインジェクション]

脳表面へのAAVインジェクション

No.10264-TOPIC - 2022/02/17 (木) 22:04:33 - sono

マウスでの実験を始めたばかりの素人です。
ステレオで脳皮質の浅い部分（200-300um）へinjectionしたいのですが、どうしても発現したりしなかったりでばらついてしまいます。
インジェクション中に実体顕微鏡で見ると、針先が脳内に入ってることは確かなのに、脳表面から液が漏れ出ているのが見える時もあります。
これが原因なのでは、と思っているのですが、どうやったら防げますか？

インジェクションのボリュームは100nLほどで、５分かけて注入しています。
なにかコツや注意点などご存知の方いれば教えてください。
よろしくお願いいたします。
　

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No.10264-6 - 2022/02/21 (月) 15:52:03 - Karas

大動物では、脳に電極を刺してCTを取るとかなりゆっくり（１時間近くかけて）歪んだ組織が戻り、電極が所定の位置にきます。そのためげっ歯類でも、私は待てるだけ待つようにしています。私は10分待ち、注入し、更に10分待っています。注入後にも待つことで、針先を引き抜く際にトラックに沿ってウイルス液が漏出するリスクが減ります。

また正確に深さをコントロールしたい時には、少し深く刺すステップを外し、その代わりに針を所定位置に置いてから30分以上待って注入しています。

この少し深く刺すに関しては、空間を作っているのかは分かりません。

あれこれ書きましたがオペの手技に関しては結果オーライです。またすでに論文等を出しているラボに習いに行くのが一番です。生理研では脳の特定部位に注入するトレーニングコースがあります。

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No.10264-5 - 2022/02/18 (金) 14:14:58 - sono

Karasさん

ありがとうございます。
静置の時間を3分程度しかとっていなかったので、もう少し伸ばしてみようと思います。
少し深くまで刺すのは一応僕もやっていますが、これって液が入るスペースを作っているということなんでしょうか。
すでにガラスピペットを使っています。

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No.10264-4 - 2022/02/18 (金) 14:11:43 - sono

uLではなく、nLです。血管などではなく局所に投与しています。
シリコンオイルを使ったインジェクターです。

(無題)

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No.10264-3 - 2022/02/18 (金) 11:51:38 - Karas

典型的には、ほんの少し深く入れてから所定の深さに戻し、10分ほど待ってから注入、注入も出来るだけゆっくりと行い、注入後も暫く待ってからゆっくりと引き抜く。

あとは浅いところですし、先端がブラントの針を使っているのであれば、ガラスピペットの方がオペの失敗は少なくて済むのでお勧めです。