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βアクチン 42kDaより大きなバンド トピック削除
No.10244-TOPIC - 2022/02/10 (木) 14:15:58 - バンド
いつもありがとうございます

ウェスタンで細胞の破砕液をβアクチン抗体で検出したのですが
メインの濃いバンドが50 kDaあたりにあります。(βアクチンは42 kDa)
なんとなく42kDaの所にもバンドが出ている気はするのですが、50kDaのバンドってなんなのでしょうか。非特異な何かでしょうか

検出は、2次抗体にHRP標識抗体を用いてそれで実施しています。
 
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No.10244-6 - 2022/02/14 (月) 06:58:28 - おお
使用している抗体を開示してください(モノクローナルならクローン名とか、購入先とカタログ番号とか)。信用がある抗体ならべジャーなバンドがアクチンであると言える場合もあります。

(無題) 削除/引用
No.10244-5 - 2022/02/11 (金) 00:19:43 - あsdfghj
分子量マーカー、特に着色分子量マーカーを異なるメーカーのものを、(または有色と無色で)並べて流すと分子量と移動度(位置)がズレてることがあります。分子量マーカーのメーカーを変えたら分子量と移動度の対応がおかしくて、メーカーに聞いたら、実際そういうことはあるけど、着色の影響とかによるのでどこのマーカーでもそういうことはあるのでしょうがないですということでした。有色マーカーについては注意事項にそのようなことが書いてあるのをみたことあります。。

あと昔の話ですが、抗体買ったら、抗体の中身とラベルが違ってたことあります。

(無題) 削除/引用
No.10244-4 - 2022/02/10 (木) 18:00:38 - A549
抗体や細胞によるとは思いますが。
以下のA549はイメージと近そうですね。

https://www.abcam.co.jp/hrp-beta-actin-antibody-ac-15-ab49900

https://www.origene.com/catalog/antibodies/primary-antibodies/ta355036/beta-actin-actb-rabbit-polyclonal-antibody

(無題) 削除/引用
No.10244-3 - 2022/02/10 (木) 17:30:39 - バンド
ありがとうございます。

実は42kDaの所にもうっすらバンドは出ているのです、、、。

(無題) 削除/引用
No.10244-2 - 2022/02/10 (木) 16:57:00 - おお
泳動条件やマーカーによってはそれぐらいに見えなくもないと思いますが、、、
以下のリンクの図を食っていくとWBでは43kDaかなと思える位置にあるけどIPに使用可能であることを示す図は50弱に来ている。

https://abclonal.com/catalog-antibodies/ActinMousemAb/AC004

βアクチン 42kDaより大きなバンド 削除/引用
No.10244-1 - 2022/02/10 (木) 14:15:58 - バンド
いつもありがとうございます

ウェスタンで細胞の破砕液をβアクチン抗体で検出したのですが
メインの濃いバンドが50 kDaあたりにあります。(βアクチンは42 kDa)
なんとなく42kDaの所にもバンドが出ている気はするのですが、50kDaのバンドってなんなのでしょうか。非特異な何かでしょうか

検出は、2次抗体にHRP標識抗体を用いてそれで実施しています。

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