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(無題) 削除/引用 No.10199-5 - 2022/01/25 (火) 13:04:53 - WInter-8 先行研究と比べて、発現するタンパク質の配列も全く同じでしょうか？ pET15bだとHis-tagの後ろにthrombin認識配列があり、もちろん制限酵素サイトの位置によって変わってくると思います。His-tagの後ろのリンカーの長さが溶解度に影響することも十分考えられます。

(無題) 削除/引用 No.10199-4 - 2022/01/25 (火) 11:14:44 - てて オワンクラゲ系の蛍光タンパク質はC末がプラプラしていてフォールディングや分子内FRETを試みる時にいろんな弊害が出ることがある、と小耳に挟んだことがあります。 リンカーやCFP、YFPにもよるでしょうが、前述の要因やその他の要因によっても単純に入れ替えるだけではダメなことはあり得ると思います。

(無題) 削除/引用 No.10199-3 - 2022/01/25 (火) 10:40:35 - pET はい。全て同じです。先行研究のタンパク質と自分の目的タンパク質を同時に発現を行なって比較したのですが、先行研究の方は、大部分が可溶性分画に行って、自分の目的タンパク質は、ほとんど不溶性分画でした。 あと、書き忘れていたのですが、自分の目的タンパク質ですが、his-tagの影響を考えてHis-tag位置をC末端からN末端の変更して行なったのですが、改善されませんでした。

(無題) 削除/引用 No.10199-2 - 2022/01/25 (火) 08:16:14 - おお まず、先行研究と全く同じ大腸菌、誘導条件、可溶化条件を使ってますか？先行研究は不溶分画にどれくらいのタンパクがあるか示されてますか？

pET系ベクターの種類による溶解度の変化について 削除/引用 No.10199-1 - 2022/01/24 (月) 21:12:47 - pET あるタンパク質(A)の両端にCFP、YFPが融合したタンパク質(CFP-A-YFP)をpET21とBL21(DE3)に発現させています。このタンパク質が可溶性分画に行かず、困っています。 先行研究で、CFP、YFPを入れ替えたタンパク質(YFP-A-CFP/pET15)は可溶性分画に行ってるのですが、 pET15とpET21の違いしか考えらないのですが、文献をあさっても出てきません。このような事例ってあるのですか？　ご教授ください。

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