BioTechnicalフォーラム [大腸菌遺伝子の哺乳類培養細胞での発現]

大腸菌遺伝子の哺乳類培養細胞での発現

No.10188-TOPIC - 2022/01/18 (火) 22:17:02 - しらかば

いつも興味深く拝見しております。

大腸菌のとあるDNA結合タンパク質を、哺乳類培養細胞（NIH/3T3など）で
発現させる実験を行いたいと考えております。

しかし、原核生物の遺伝子を真核生物で発現させた論文は発見できず、
プロトコルはおろか、そもそも実現可能なのかもわからず困っております。
（真核生物の遺伝子を大腸菌で大量発現させるのは日常的に行われますが…）

もしご経験がある方がいらっしゃいましたら、実現可能性や注意点について教えていただけますと幸いです。

また、DNA結合タンパク質を哺乳類培養細胞の核内に移行させるには、
核移行シグナルPKKKRKVを付加すればよいのでしょうか。

最後に、もし良い参考文献などがございましたら、ご教示いただけますと幸いに存じます。

どうぞよろしくお願いいたします。
　

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No.10188-10 - 2022/01/19 (水) 12:01:41 - しらかば

皆様

たくさんのコメントいただきありがとうございます。

ご教示いただいたように、TetR, Cas9, Creなど原核生物由来の遺伝子は
分子生物学ツールとして普及しておりましたね…全く盲点でした。

オリジナルの配列からどのように改変されて現在利用されているのか、
改めて調査したうえで本命の実験に挑みたいと思います。

(無題)

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No.10188-9 - 2022/01/19 (水) 11:27:00 - おお

>DNA結合タンパク質を哺乳類培養細胞の核内に移行させるには、
>核移行シグナルPKKKRKVを付加すればよいのでしょうか。

もともとバクテリア由来で、核移行が望めないなら、それでやるのが常套手段ですが、絶対うまく行くかと言われると、わかりません。

ここですでに上がっているタンパクも核移行シグナルを付け足したものがあるのでそういうのも参考にするといいかと思います。

(無題)

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No.10188-8 - 2022/01/19 (水) 07:35:52 - 中年

×挙げたい
○上げたい

(無題)

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No.10188-7 - 2022/01/19 (水) 07:34:49 - 中年

Diphtheria Toxin、Cas9、Cre（ファージだけど）なんかもそうですね。

発現量を挙げたいときには哺乳類型にcodon optimizedしたりしますね。

(無題)

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No.10188-6 - 2022/01/19 (水) 03:24:29 - おお

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0378111996002168?via%3Dihub