Bio Technical フォーラム

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フローサイトメトリーでのisotype controlの必要性 トピック削除
No.10144-TOPIC - 2022/01/02 (日) 02:06:11 - EDD
フローサイトメトリーで、薬剤A処理群と非処理群の比較を行っています。
APC-CD分子を結合し、ヒストグラムで比較を行っています。

2群には、明らかな差が出ていますが、同僚にisotype controlの必要性を指摘されました。

フローサイトメトリーはあまり行わないラボなので、同僚の話も半信半疑なのですが、この場合は実質非処理群がコントロールのような役割を果たす気がするのですが、本当に必要なんでしょうか。あった方がいいのは間違いないと思いますが、やり直すのもそれなりに大変なので、躊躇しています。
 
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(無題) 削除/引用
No.10144-5 - 2022/01/05 (水) 02:22:08 - おお
質問の文章から抗体を使っているのかよくわからなかったです。

抗体の特異性以外で抗体への親和性が上がる可能性を考えなくてもいいのですか?

(無題) 削除/引用
No.10144-4 - 2022/01/04 (火) 09:17:17 - -_-
ピークが2つに分かれて片方が陽性で片方が陰性だと抗体で特異的に染まっていると感じますが、陽性細胞の割合が少なかったり、全体がピークシフトしているとノンスぺっぽくも見えるのでコントロールがいると思います。

(無題) 削除/引用
No.10144-3 - 2022/01/03 (月) 10:21:43 - PF
使ってる細胞の種類、ブロッキング方法、調べているCD分子の発現レベル、などに依ります。

あなたの実験条件で非染色とアイソタイプ染色がどうなるか、一回見ておいた方が無難かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.10144-2 - 2022/01/02 (日) 18:43:15 - tt
薬剤処理が細胞の代謝を変化させる場合、薬剤処理後に細胞の自家蛍光が変化する可能性があります。その可能性を除外することは最低限必要かもしれません。

非染色サンプルでの確認により、両群の差が明らかな場合は、代用を許容される場合も考えられますが、アイソタイプ抗体を用いた方が査読の上では無難かもしれません。

フローサイトメトリーでのisotype controlの必要性 削除/引用
No.10144-1 - 2022/01/02 (日) 02:06:11 - EDD
フローサイトメトリーで、薬剤A処理群と非処理群の比較を行っています。
APC-CD分子を結合し、ヒストグラムで比較を行っています。

2群には、明らかな差が出ていますが、同僚にisotype controlの必要性を指摘されました。

フローサイトメトリーはあまり行わないラボなので、同僚の話も半信半疑なのですが、この場合は実質非処理群がコントロールのような役割を果たす気がするのですが、本当に必要なんでしょうか。あった方がいいのは間違いないと思いますが、やり直すのもそれなりに大変なので、躊躇しています。

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