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(無題) 削除/引用 No.10136-7 - 2021/12/25 (土) 11:55:14 - 中年 低温室で泳動すると分離が良くなります。Mupidなら50Vで。

(無題) 削除/引用 No.10136-6 - 2021/12/25 (土) 09:23:50 - s だいたい言いつくされてるけど、つけ加えるとすれば、ゲルの底面に近いほうが早く流れて結果としてバンドが横から見るとななめになっていることがあるので、それを意識して2kbと3kbの間にカッターを入れるといいかも。(無理に角度をつけて切る必要はないが、意識しているだけでもだいぶ違う)

(無題) 削除/引用 No.10136-5 - 2021/12/25 (土) 01:18:04 - おお 1%でもそんなに難しくはないはず。オーバーロードをしないようにして、ある程度泳動距離を稼ぐとよりいいと思う。１５cmぐらい泳動できる泳動そうとかあればそういうのを使うといいと思う（サザンブロッとなどでよく使われていたので昔からあるラボならどこかにしまってあるかも）。mupidでも一回り大きいゲルトレイがあったはず。

(無題) 削除/引用 No.10136-4 - 2021/12/24 (金) 23:08:40 - み 0.7パーセントで40-50分流して分離すれば可能だと思う。 他の人も言っているように2kbの方が内部で切れる酵素を加えることを考えるかな。

(無題) 削除/引用 No.10136-3 - 2021/12/24 (金) 19:01:13 - G25 オーバーロードしなければ、あるいは十分に広いウェルを使えば（あるいは複数レーンを使用するか）、それほど難しい分離でもないと思いますけど。 レーンを広くするとアガロースゲル量が増えてしまいますが、シリカ法で精製するならmelting/binding solnだけスケールアップすれば、シリカからの溶出液量はかわらないわけですから。 いまはそんなのクレージーだとわかっているのでやらないけど、昔はmupidのゲル一枚をいっぱいいっぱいに使って数ugのDNAを切り出すなんてこともした。 ちなみに、どれくらいのスケール感？　（DNA量とウェル幅、泳動距離など）。 よくやる手としては、 2 kbの断片を更に切断するけど3 kb断片は切らない制限酵素で消化して、2 kbをもっと細切れにすれば、3 kbの分離が良くなる。 泳動電圧は可能な限り下げる。高い電圧で速く流すとラッシュアワーで人が殺到するのと同じで、DNA断片が分子ふるいに一気になだれ込み、乗り遅れた分子がtailingする（イメージです）。

２キロと３キロの DNA 断片を分離したい 削除/引用 No.10136-1 - 2021/12/24 (金) 18:23:46 - アガロースゲル アガロースゲル電気泳動で２キロと３キロの DNA 断片を分離し、３キロのフラグメントのみを切り出して使用したいです。何%のゲルを作れば綺麗に分離できるでしょうか。 1%、0.8%を試しましたがうまくいきませんでした。

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