Bio Technical フォーラム

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PFA固定組織からDNA抽出 トピック削除
No.1013-TOPIC - 2012/10/12 (金) 03:32:36 - 耳学問
マウスを使った実験をしています。
 4%PFAで固定した組織からDNA抽出、Genotypingを行いたいのですが方法を教えてください。
 うちの研究室ではtail sampleをPCR directで溶解させてgenotypingを行っていますが、恥ずかしながら溶解液を誤って廃棄してしまい固定した組織からの抽出を考えています。
 研究室にTRI Reagentがあったので試してみましたが、多量の不純物(蛋白?)が析出してしまい、うまくいきませんでした。骨格筋組織が比較的豊富にありますのでそれらから抽出したいと考えています。周りにキット以外での抽出経験がある人が居ないため、相談させていただきます。
 よろしくお願いいたします。
 
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>Bluehornet様 削除/引用
No.1013-3 - 2012/10/16 (火) 05:46:23 - 耳学問
お返事ありがとうございます。
早速調べてみたいと思います。サンプルはなんだかんだで固定から1ヶ月程度経過してしまいましたが、早いうちに取り出したほうが良さそうですね。

(無題) 削除/引用
No.1013-2 - 2012/10/12 (金) 09:29:10 - bluehornet
小さく切った組織をSDS-TE系のlysis bufferとproteinase-Kて消化してからフェノクロエタ沈でDNA回収できますよ。ウェブ上でプロトコールは見つかると思います。ですが、あまり固定の時間が長いようだと、ホルムアルデヒドの酸化によるギ酸の生成でpHが酸性に傾いて、DNAの断片化が進んでいるかもしれません。genotypingと言うことですからあまり問題にはならないかもしれませんが。

PFA固定組織からDNA抽出 削除/引用
No.1013-1 - 2012/10/12 (金) 03:32:36 - 耳学問
マウスを使った実験をしています。
 4%PFAで固定した組織からDNA抽出、Genotypingを行いたいのですが方法を教えてください。
 うちの研究室ではtail sampleをPCR directで溶解させてgenotypingを行っていますが、恥ずかしながら溶解液を誤って廃棄してしまい固定した組織からの抽出を考えています。
 研究室にTRI Reagentがあったので試してみましたが、多量の不純物(蛋白?)が析出してしまい、うまくいきませんでした。骨格筋組織が比較的豊富にありますのでそれらから抽出したいと考えています。周りにキット以外での抽出経験がある人が居ないため、相談させていただきます。
 よろしくお願いいたします。

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