Bio Technical フォーラム

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HEC1B, AN3CAでのプロモーター選択 トピック削除
No.10128-TOPIC - 2021/12/22 (水) 04:52:59 - ym
いつも参考にさせていただいております。

現在自作のプラスミドを作成中で、プロモーター選択で悩んでおります。
dual promoterを考えており、一つはCMV promoterにする予定です。
もう一つのpromoter候補としてはmPGKを考えておりますが、使用経験がないため発現効率に不安を覚えています。

子宮体癌細胞株である、HEC1B、AN3CAにレンチウイルスを用いて導入予定ですが、これらの細胞においてPGKをpromoterとして選択した際の発現効率が問題なかったか、ご教示いただければ大変ありがたいです。

よろしくお願い申し上げます。
　
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(無題) 削除/引用
No.10128-2 - 2021/12/22 (水) 12:35:11 - おお
https://pdfs.semanticscholar.org/ca66/46e62b021f16ff7167f66c6bd4c83a08b901.pdf
こちらの文献ではピューロマイシン耐性遺伝子をPGKプロモーターで発現するノックダウン用ベクターでレンチウイルスベクター作り、AN3CAでピューロマイシンでセレクションできているようです。

＞これらの細胞においてPGKをpromoterとして選択した際の発現効率が問題なかったか

上記のように薬剤耐性マーカーでたいてい問題はないようですが、あなたが発現しようとしているタンパクが細胞内で効果的に活性を示すレベルに達するかはわからないので、あなたの実験において問題かどうかは答えようがありません。

HEC1B, AN3CAでのプロモーター選択 削除/引用
No.10128-1 - 2021/12/22 (水) 04:52:59 - ym
いつも参考にさせていただいております。

現在自作のプラスミドを作成中で、プロモーター選択で悩んでおります。
dual promoterを考えており、一つはCMV promoterにする予定です。
もう一つのpromoter候補としてはmPGKを考えておりますが、使用経験がないため発現効率に不安を覚えています。

子宮体癌細胞株である、HEC1B、AN3CAにレンチウイルスを用いて導入予定ですが、これらの細胞においてPGKをpromoterとして選択した際の発現効率が問題なかったか、ご教示いただければ大変ありがたいです。

よろしくお願い申し上げます。
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