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細胞接着分子の同定方法 トピック削除
No.10116-TOPIC - 2021/12/19 (日) 15:33:50 - imc
別トピックでフローサイトメトリーの質問をしのたですが、そもそも方法論で迷いが生じたので質問させていただきます。

二つの異なる細胞の接着に重要な接着因子の同定をCas9スクリーニングで目指しています。当初は、2種類の細胞を混ぜて、フローサイトメトリーでダブルポジティブの細胞だけを選択しようと考えたのですが、フローサイトメトリーで圧がかかって細胞が分離してしまうことを考えるとこの手法は妥当ではないと考えるようになりました。

できればCas9ベースがいいのですが、このような実験系で何かいいアイデアはないのでしょうか。ターゲットをCD分子だけに絞ることも考えているのですが、絞るとスクリーニングにかかる費用が莫大なものになる気もします。何かCD分子だけに絞ったライブラリーのようなものはないでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.10116-4 - 2021/12/24 (金) 05:42:49 - imc
アドバイスありがとうございます。

そもそも論として、調べてみるとCas9ベースで細胞接着を調べている例が皆無に近いので、スクリーニングには適さないのだと愚考しています。

細胞接着自体が確率論にも依存するので、いろいろな方策を練る必要がある気がしています。

(無題) 削除/引用
No.10116-3 - 2021/12/21 (火) 13:32:13 - ema
FCMなら低速のダメージレスセルソーターと呼ばれるものなら比較的接着したままかもしれません。
キャピラリー式のセルピッカーなどで接着した細胞を分取しても良いと思います。
細 胞 配 列 チップSIEVEWELL などでも観察しながらWellを選択してゆく方法もあります。

どこかの教室が機器を持っていれば下記のような解析もあります。

https://kiko-tech.co.jp/products/biosensing-instrument-sprm-200/

https://ruo.mbl.co.jp/bio/product/flprotein/special-talk/fluoppi.html

(無題) 削除/引用
No.10116-2 - 2021/12/20 (月) 09:11:20 - おお
細胞同士が接着しているだろう状態のときにケミカルクロスリンクをしてしまえばはずれないかも。接着してたら100%クロスリンクするわけではないから3次スクリーニングまでやるとかいろいろ濃縮方法が必要かもしれませんけど。

あとは、片方の膜成分を何らかの表面とかに固定するとか。

細胞接着分子の同定方法 削除/引用
No.10116-1 - 2021/12/19 (日) 15:33:50 - imc
別トピックでフローサイトメトリーの質問をしのたですが、そもそも方法論で迷いが生じたので質問させていただきます。

二つの異なる細胞の接着に重要な接着因子の同定をCas9スクリーニングで目指しています。当初は、2種類の細胞を混ぜて、フローサイトメトリーでダブルポジティブの細胞だけを選択しようと考えたのですが、フローサイトメトリーで圧がかかって細胞が分離してしまうことを考えるとこの手法は妥当ではないと考えるようになりました。

できればCas9ベースがいいのですが、このような実験系で何かいいアイデアはないのでしょうか。ターゲットをCD分子だけに絞ることも考えているのですが、絞るとスクリーニングにかかる費用が莫大なものになる気もします。何かCD分子だけに絞ったライブラリーのようなものはないでしょうか。

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