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プラスミドの純度を上げるには トピック削除
No.10104-TOPIC - 2021/12/14 (火) 15:30:43 - まっちゃ
 いつもお世話になっております。

 細胞にトランスフェクションするプラスミドをDH5α株にトランスフォーメーションし、コロニーを2 mlのアンピシリン含有LB液体培地で15時間振盪培養し、濁っているのを確認してからVIOGENE社のMini Plus Plasmid DNA Extraction System によって精製しているのですが、260/280 が2.0付近で困っています。

RNaseAも既定のバッファーに入れていますし、何処で純度が下がっているのかがわかりません。

後からの処理でプラスミドの純度を上げることはできないのでしょうか。
ご存じの方がいらっしゃればご教示ください。
 
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No.10104-4 - 2021/12/14 (火) 18:50:30 - おお
たしかEDTAとか入っていたら260/280は高めに出ますね。そうなら、だいたいそんなもんじゃないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.10104-3 - 2021/12/14 (火) 18:23:44 - s
泳動してRNAが見えなければ、全く気にしないと思います。

(無題) 削除/引用
No.10104-2 - 2021/12/14 (火) 15:44:46 - G25
別に260/280 が2.0だって悪かないですよ。
Ratio OD260/280を過信しすぎ、気にし過ぎのひと多すぎ。
そのDNAで困った問題が起きているわけ?

1.8より明らかに低いのは純粋のDNAからは遠いってのはわかる。
それ以外の情報はなにもあてにならない。
1.8だから純度が高いという証明にはならないわけだし。
そのへんの論議はMolecular Cloningのようなちゃんとした教科書ではしているんだけれど、
アンチョコ的なマニュアル見て、「1.8に近ければ純度が高い、はすれていたら低い」って皮相的なことだけ教条的に信じ込んで、固執している人のなんと多いことか。

プラスミドの純度を上げるには 削除/引用
No.10104-1 - 2021/12/14 (火) 15:30:43 - まっちゃ
 いつもお世話になっております。

 細胞にトランスフェクションするプラスミドをDH5α株にトランスフォーメーションし、コロニーを2 mlのアンピシリン含有LB液体培地で15時間振盪培養し、濁っているのを確認してからVIOGENE社のMini Plus Plasmid DNA Extraction System によって精製しているのですが、260/280 が2.0付近で困っています。

RNaseAも既定のバッファーに入れていますし、何処で純度が下がっているのかがわかりません。

後からの処理でプラスミドの純度を上げることはできないのでしょうか。
ご存じの方がいらっしゃればご教示ください。

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