Bio Technical フォーラム

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共焦点イメージングに疑問があります。教えてください。 トピック削除
No.10100-TOPIC - 2021/12/13 (月) 20:46:03 - 教えてください。
いつも拝見しています。
20 mm glass bottom dishに細胞を撒いて、固定、染色後にその共焦点画像をイメージングしたいです。

まず細胞をそのdishに撒いて、培養。その後固定して、染色。

最後にdishに一滴mounting mediaを垂らし、さらにcover slipを載せて、正立顕微鏡でイメージングしています。この方法で正しいでしょうか?

知り合いからは、glass bottom dishは倒立で見るのが普通だと言われましたが、その場合はライブイメージングではないかと思います。私のようにすでに固定し染色したサンプルでしかもcover slipで封入しているので、正立でも倒立でもどちらからでもいいのではないかと思いますが、私の理解は正しいでしょうか?

正立でイメージングする際にはきちんと対物レンズは問題なくモノを捉えています。

大変稚拙な質問で恐縮ですが、コメントいただけますと幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.10100-4 - 2021/12/13 (月) 23:36:35 - sss
>[Re:1] 教えてください。さんは書きました :
> 知り合いからは、glass bottom dishは倒立で見るのが普通だと言われましたが、その場合はライブイメージングではないかと思います。
そうですね。もちろん固定させた場合でも倒立で見ることもできますね。

> 私のようにすでに固定し染色したサンプルでしかもcover slipで封入しているので、正立でも倒立でもどちらからでもいいのではないかと思いますが、私の理解は正しいでしょうか?
> 最後にdishに一滴mounting mediaを垂らし、さらにcover slipを載せて、正立顕微鏡でイメージングしています。この方法で正しいでしょうか?
> 正立でイメージングする際にはきちんと対物レンズは問題なくモノを捉えています。
正しいと思います。観察する距離とカバースリップが対物レンズに合っているのであれば問題ないと思います。

(無題) 削除/引用
No.10100-3 - 2021/12/13 (月) 23:32:04 - AA
別にどちらからでも見えるとは思いますが、正立で見るなら普通のディッシュでいいですね。
レンズとサンプルの間に入るガラスの厚みの問題で、倒立の場合は床面をカバーガラスにする必要があるだけなので。
ガラスボトムディッシュはガラス面とプラスティック面の接着部のせいでフラットにできにくいし、封入もしづらいのでは?

私は、カバースリップをディッシュに沈めてその上から播種し、最終的にそれを回収してスライドガラスに封入したりします。

(無題) 削除/引用
No.10100-2 - 2021/12/13 (月) 21:37:02 - あの
使える顕微鏡に合わせるのが現実的でしょうね。

グラスボトムディッシュは高いから、お知り合いの言う通りに、
普通は倒立で下から見るでしょうけど。

もし正立も倒立も両方使えるなら、上からと下からと両方みた方が良いと思うけど。
特に厚さのある細胞を高倍率で見たいなら。

共焦点イメージングに疑問があります。教えてください。 削除/引用
No.10100-1 - 2021/12/13 (月) 20:46:03 - 教えてください。
いつも拝見しています。
20 mm glass bottom dishに細胞を撒いて、固定、染色後にその共焦点画像をイメージングしたいです。

まず細胞をそのdishに撒いて、培養。その後固定して、染色。

最後にdishに一滴mounting mediaを垂らし、さらにcover slipを載せて、正立顕微鏡でイメージングしています。この方法で正しいでしょうか?

知り合いからは、glass bottom dishは倒立で見るのが普通だと言われましたが、その場合はライブイメージングではないかと思います。私のようにすでに固定し染色したサンプルでしかもcover slipで封入しているので、正立でも倒立でもどちらからでもいいのではないかと思いますが、私の理解は正しいでしょうか?

正立でイメージングする際にはきちんと対物レンズは問題なくモノを捉えています。

大変稚拙な質問で恐縮ですが、コメントいただけますと幸いです。

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