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(無題) 削除/引用 No.10099-2 - 2021/12/14 (火) 07:01:07 - おお あなたの使っている物質とやらにおいてそれがベストなプロトコールかどうかわかりませんが（無血清で処理とか、）、おおかたそんなものかもしれません。 処理後どれくらいのROSがあるかという視点から、その物質（薬剤）で処理してからDCFDAを加えて１０分程度Incubationするという方法のほうがわかりやすいと思います。濃度はThermo(molecular probes)のプロトコールだと ~1–10 uMと書いてますね。至適濃度は実験によって違うでしょうから、お示しの濃度が絶対に駄目とまでは言えませんが。 https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp36103.pdf

DCFDAを使ったROSの測定 削除/引用 No.10099-1 - 2021/12/13 (月) 12:31:33 - たなみ 接着細胞をある物質で刺激した際のROSをDCFDAを使って測定したいと思っています。 はじめにROSを増加させることが知られている物質で試してみたところ、濃度依存的に蛍光が減弱しました。 ROSの増加→蛍光増強だと考えていたののですが、プロトコールや解釈が違っているのでしょうか。 以下のプロトコールで行っているのですが、間違っている点、改善点等がありましたらご教授いただけると幸いです。 ・接着細胞を血清入りの培地で80％コンフまで培養 ・50μM DCFDA入りの無血清培地に交換し、45分間インキュベート ・PBSでWash後、被験物質入りの無血清培地に交換し、1,3,6時間インキュベート ・PBSでWash後、PBSを加えプレートリーダーで蛍光（485/535nm）を測定 DCFDAはDMSOで50mMにしたものを培地と混和しています。

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