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(無題) 削除/引用 No.10097-5 - 2021/12/15 (水) 23:56:26 - s なるほど、相同組換え率が低いのですね。 もし発現効率をあげるためにプラスミド導入後に一過的に薬剤選択をするのだとしたら、oriのないプラスミドは染色体にintegrationされる危険性が高いですね。それを避けるためにoriを持たせているのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10097-4 - 2021/12/15 (水) 19:55:01 - pen ご回答ありがとうございます。 対象は酵母ですが、特殊な酵母で相同組み換え率が大変低いためゲノム編集を使おうと考えています。 oriがないプラスミドでも導入後一過的に発現してくれればいいかと思うのですが、効果を十分出すにはある程度の発現量が必要と思うのでコピー数がある程度ないとダメなんでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.10097-3 - 2021/12/14 (火) 15:33:26 - s ARSって、oriのことでしょうか。培養細胞でCrisprベースの遺伝子改変をする時にはoriの存在を気にすることはないと思いますが、addgeneで出芽酵母用のCAS9/gRNA vectorを検索すると、確かに2ミュープラスミド上に構築したものが多いですね。何か意味があるのかは知りません。自分も知りたい。 そもそも遺伝子破壊にCrisprを使う必要がある微生物なのでしょうか。そんなに相同組換え頻度が低いのですか。

ゲノム編集用ベクター 削除/引用 No.10097-1 - 2021/12/12 (日) 10:34:06 - JK ある微生物の遺伝子破壊のためにゲノム編集をおこなおうとしています。 Cas9, gRNA発現のためのベクターにARSは必須でしょうか。ARSを含まないベクターを使っている例もあるようですが。。

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