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(無題) 削除/引用 No.10047-3 - 2021/11/18 (木) 18:53:22 - ELISA おお様 ご回答ありがとうございます。 ご提案いただいた方法で試してみます。 また今回の解析では、転写因子も対象としております。 この点についてもご経験上、注意点等あればご教授いただけると助かります。

(無題) 削除/引用 No.10047-2 - 2021/11/18 (木) 11:09:23 - おお RIPAで超音波破砕しないと目的のタンパクは溶出しませんか？ PIPAに３mMほどのMgCl2を加えるとLysateがどろどろになりません。DNAを含む不溶成分が出ますがプレートごと遠心できるなら、まずRIPA+MgCl2を加えてボルテックスなどで細胞内容物がとけて均一になるよう撹拌して、遠心後上清を回収すればいいです。１％Triton X-100で十分溶出できるタンパクならRIPAの代わりにTBS+1% Triton （１mM MgCl2が入ってたほうがいいかな）で上記の要領でいいし。Cytosolの可溶性タンパクなら場合によってはDetergentをもっと低くしてもいい。

96well plateからの細胞抽出液作製 削除/引用 No.10047-1 - 2021/11/18 (木) 10:02:58 - ELISA いつも参考にさせていただいております。 96well plate中で培養している細胞から抽出液を作製、その後、ELISA解析したいと考えています。一般的にはRIPA bufferなどを加えて超音波破砕をしますが、96well plateでの処理を考えると煩雑です。 そこでご質問させていただきたいのですが、96 well plateで細胞抽出液を作製する場合のコツやおすすめ方法があればご教授いただけないでしょうか。理想としては、96well plateでサンプル調整→新しい96well plateに移して保管→一部を使ってELISA（96 well）解析、の流れを作りたいです。 どうぞよろしくお願い致します。

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