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(無題) 削除/引用 No.10032-6 - 2021/11/17 (水) 00:12:56 - lkjhgfds 蛋白質の名前と抗体の素性（認識部位とか、ポリor モノかとか）please。でないと一般論止まりで、問題（必ずしも問題でないかもしれないけど）解決につながる具体的なアドバイスを得るのは難しいと思う。

(無題) 削除/引用 No.10032-5 - 2021/11/16 (火) 03:47:37 - おお どっちも本物かもしれませんし、KDとかでKOで確かめれば結論が出やすいでしょう。違う抗体で検出できれば完璧ではないけどより本物らしいと言えるでしょうけど、片方で検出できなかったからノンスペと言い切るのは危険です。でもそういうやり方もあるということで。

(無題) 削除/引用 No.10032-4 - 2021/11/16 (火) 00:02:27 - 匿名 ありがとうございます。 リン酸化バンドの37kda、タンパクのバンドの35kdaと30kda程度があり35kdaと30kdaどちらが本当のこのタンパクのバンドかわからないという感じです。リン酸化バンドは35kdaに近いので、こちらが本物ではないかと考えていますが。siRNAでも処理して確かめてみるくらいしかないのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.10032-3 - 2021/11/13 (土) 20:11:33 - おお >まずリン酸化バンドとタンパクのバンドで位置に違いが出る事はあり得るのか たぶんリン酸化されたバンド３７kDaがタンパク全発現をウェスタンブロットで検出できないことの懸念だと思いますが、大抵の場合、そういうことはありません。ただし全く可能性がないかと言われれば理屈上はいくつか考えられることはあります。 ＞リン酸化の37kdaとタンパクの30kdaは大きく位置が異なり、これだけ離れる事があるかという点です。 あるでしょうね。ただし、一つのリン酸化だけのある無しを見ているのかどうか、リン酸化の伴い何らかのプロセッシングをうけるとか受けにくくなるとかいろいろな可能性を考える必要があります。

(無題) 削除/引用 No.10032-2 - 2021/11/13 (土) 19:07:34 - しおりん まずリン酸化バンドとタンパクのバンドで位置に違いが出る事はあり得るのか ＞あり得ます。 これだけ離れる事があるか ＞あり得ますが、このケースが該当するかどうかは注意深く検討する必要があるでしょうね。コマーシャルな抗体のようですから、メーカーが泳動パターンについてはデータを持っていると思うのですが。また、その抗体の名前でGoogle Scholar検索してみれば用例が見つかるかもしれません。

ウェスタンブロット、リン酸化 削除/引用 No.10032-1 - 2021/11/13 (土) 17:40:59 - 匿名 お世話になります。 あるタンパク質のX番目のチロシンに対して特異的なリン酸抗体を使用して、リン酸化状態をウェスタンブロットで評価しています。バンドの位置に関して疑問があり質問です。リン酸化タンパクのバンドは37kda程度、そのタンパク全発現をウェスタンブロットで評価すると35kdaと30kda程度の位置にバンドが二本得られます。 疑問点として、まずリン酸化バンドとタンパクのバンドで位置に違いが出る事はあり得るのかという点、もう一点はあり得るとしたらリン酸化の37kdaとタンパクの30kdaは大きく位置が異なり、これだけ離れる事があるかという点です。 このタンパクは予想サイズが35kda程度で、メーカーに問い合わせるとどちらのバンドもタンパクに反応している可能性はあるとの事です。ご意見があればよろしくお願い申し上げます。

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