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(無題) 削除/引用 No.10027-6 - 2021/11/11 (木) 18:25:38 - さすらい あの様 分注はせず、毎回凍結融解を繰り返していました。 結局ケミルミでは見られないマーカーだったんですが、今後のためにも分注しておこうと思います。 ご指摘ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.10027-5 - 2021/11/11 (木) 18:21:23 - さすらい おお様、G25様 メッセージありがとうございます。 ご指摘の通り、ちゃんと確認したところケミルミ検出できないマーカーでした。 大変失礼しました。 以前使用していたのはケミルミ検出できる同シリーズのWesternCでした。 G25様のやり方を参考にさせて頂きます。

(無題) 削除/引用 No.10027-4 - 2021/11/11 (木) 18:15:31 - あの そのスタンダードは購入後にどのように保存してますか？ 例えば何度も凍結融解してれば、変なことがおきえます。

(無題) 削除/引用 No.10027-3 - 2021/11/11 (木) 17:39:19 - G25 えっと、イムノブロットの処理過程で、色素が薄くなるってことじゃなくてですか？ もともとイムノブロットで検出するようにデザインされた製品ではないですよね（当該製品は励起光を当てれば蛍光検出はできるようにはなっているようだ）。ただ、交差反応か非特異的吸着で意図ぜずマーカーのバンドが見えることがあるというのは、聞いたことありますけど。ルーチンに使用できる方法ではないですね 昔っからのやりかたは、ブロット直後ゲルを剥がした、いちばんくっきりとプレステインドマーカーがみえてるところで、バンドの位置を鉛筆でメンブレン上にマークします。 やり方古くさいですか？

(無題) 削除/引用 No.10027-2 - 2021/11/11 (木) 16:46:20 - おお あの、もし私が誤解してたら申し訳ないのですが、プレシジョンPlus Dualスタンダード（Biorad）はECL（HRP検出用試薬）では検出できないのでWBの目的のバンドと一緒にマーカーのバンドが検出されないのが普通だと思いますが、、、マーカーのタンパク量が高いので場合によってはノンスペシフィックなバンドとしてマーカーがECLで検出されることはありますけど従来期待できるものではないです。 それともメーカーの製品説明に検出できると書いてるんでしょうか、、、

WBの分子量マーカーのバンドが薄い 削除/引用 No.10027-1 - 2021/11/11 (木) 13:41:51 - さすらい いつも参考にさせて頂いてます。 WBの分子量マーカーについて、新品ですが毎回薄く出たりほとんど出ないこともあり原因が分からず困っています。 濃く出たのは5回中1回程度です。 条件は下記の通りです。 マーカー：プレシジョンPlus Dualスタンダード（Biorad） メンブレン：PVDF ブロッキング：SuperblockT20（Thermo） 一次抗体：4℃一晩 二次抗体：RT1h メンブレンへの転写はマーカーを見る限り問題なさそうですし、撮影の際にマーカー以外の目的のバンドははっきり出ています。 露光時間を延ばしてもほとんど出ないことがあるのでどうにか安定させたいです。何かアドバイス等ありましたら教えて頂けますでしょうか。 よろしくお願いいたします。

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