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(無題) 削除/引用 No.10010-6 - 2021/11/02 (火) 22:39:18 - 苦労サイト mpさん ありがとうございます。私なりに調べてみましたが、仰るようにsubG1が含まれている可能性は高そうですね。 アネキシンVの染色はやったことが無いですが、是非試してみたいと思います。 emaさん ありがとうございます。今やっている実験自体は簡単にはstable cellを作れない系なのですが、実験系が変わった際にはこういった方法もセルサイクルを見てみたいと思っていました。 どこかでうまく応用でないか考えてみます。

(無題) 削除/引用 No.10010-5 - 2021/11/02 (火) 10:13:33 - ema https://www.sartorius.com/en/applications/life-science-research/cell-analysis/live-cell-assays/cell-health-proliferation/cell-cycle 機器は違いますが、これらの色素もセルサイクル解析では使われています。

(無題) 削除/引用 No.10010-4 - 2021/10/30 (土) 21:42:31 - mp デブリと言うよりsubG1のアポトーシス細胞ではなかろうか？ だとすればアネキシンV染色で除去できるはず。

(無題) 削除/引用 No.10010-3 - 2021/10/30 (土) 11:54:20 - 苦労サイト 桜さん ありがとうございます。 デブリと一言で表現していますが、おそらく死にかけの「細胞」も含まれていると思っています。 顕微鏡で見てみても、死にかけていそうな細胞が結構付着しているので。 死細胞染色で染まるものは除外しているのですが、死細胞染色に染まらず、でも通常の細胞よりは小さくDNA染色も弱い傾向にある集団を何とか除去したいというのが、目標です。 生細胞もある程度居る条件で実験しており、それら生細胞の細胞周期を見たいと思っています。

(無題) 削除/引用 No.10010-2 - 2021/10/30 (土) 10:25:19 - 桜 加えている細胞障害が強すぎて細胞周期も何も死んでしまっている、ということはないですか？

FACSでのデブリ除去のゲーティング 削除/引用 No.10010-1 - 2021/10/30 (土) 08:40:27 - 苦労サイト 上皮系培養細胞のDNAをDAPIで染色し、FACSで細胞周期の解析を試みています。 正常コントロールは比較的きれいに染められる様になったのですが、細胞障害を加えるとおそらくデブリと思われる、通常の2倍体よりも低い輝度の部分に強すぎるピークが出現してしまい、うまく解析ができず困っています。 FSC・SSCの展開でデブリの多そうな部分を避ける様にゲートをかけたりと試みてはみるものの、正常細胞とくっきりと分離されているわけでもないので、判断基準も難しいです。（ちょっとしたゲートの掛け方次第でDAPIのヒストグラムが大きく変わってしまいます） 死細胞染色、未固定でのDNA染色、などもトライしましたが、やはりデブリが多いサンプルが散見され、サンプルの調整法としてはベストな解決法を未だ見いだせていません。 FACSで流した時に思いもよらずデブリが多いサンプルもあったりするので、何とかゲートの掛け方によりうまくデブリを除外したいのですが、デブリ除外のおすすめのゲーティング法があれば教えていただけますでしょうか？

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