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(無題) 削除/引用 No.10007-6 - 2021/11/06 (土) 14:08:59 - ななし経験者 オートクレーブすれば4%アガロースゲル/TBE緩衝液が作成できます。 しかしながら、先染め試薬とかDyeに混ぜるタイプのLED検出試薬で行うと、これらはプラスからマイナスに泳動されるので、分離が不明確になります。 12bpの差をみた経験がありますが、エチブロ後染めが必要です。

(無題) 削除/引用 No.10007-5 - 2021/10/29 (金) 16:47:55 - おお http://docs.smobio.com/document/doc/PV/DM2200.pdf いろいろなメーカーが様々なサイズのレンジのマーカーを販売していてその流れ具合のイメージを示しています。上記に示した商品では同じマーカーを２％アガロースと８％PAGEで流してます。 ２％アガロースである程度２００と１００bpsの間が空いてますが、泳動の流れ方の原則的なあり方を考えると１５０bpsは２００と１００bpsの間の真ん中よりいくらか上に来ますので、分解能よく流せば150と185bpsはっきりわかるであろうけどそうでなければなんかちょっとずれてるなという感じに見えるでしょう。こういう図はチャンピオンデーターを出してくるだろうし、おそらくミューピッドより泳動距離が稼げるようなゲルを使っているような気もします。実際２％であなたの環境では厳しいわけですし、それ以上の濃度が必要ということになります。私も含めてみなさんがおっしゃる３％はいるかなということです。 同時に８％PAGEのイメージも載っています。PAGEは非常に厳密にやると１bpの違いをうまく見れる系です。リンクの図に載っているように２００と１００bpsの間はかなり余裕があり、より分解能があることがわかります。研究室の環境、手癖で多少前後するかもしれませんのである程度濃度は臨機応変に決めてください。

(無題) 削除/引用 No.10007-4 - 2021/10/29 (金) 11:23:36 - み ３％アガロース TAEよりTBEの方が良い 100, 130bpでも分離可能

(無題) 削除/引用 No.10007-3 - 2021/10/29 (金) 06:28:44 - G25 3%から4%くらいのアガロースで分離できると思います。 NuSieveのような低融点アガロースが理想的。

(無題) 削除/引用 No.10007-2 - 2021/10/29 (金) 01:09:28 - おお ポリアクリルアミドゲル（PAGE)が手っ取り早いと思います。アガロースなら３％ぐらいはいるかな。

35塩基の違いを電気泳動でみるための％ゲル濃度 削除/引用 No.10007-1 - 2021/10/29 (金) 00:47:21 - PCR PCRで遺伝子編集した細胞のPCRをデザインしました。 wtと変異体のPCR産物のシークエンスから、うまくワークしています。 ただ35塩基の違いがしっかり明瞭には見えていません。 1%, 2%と振ってはみたものの、上に上がっているようには見えます。 ヘテロは二本見えています。が分離が悪くほぼヘテロはスメアにも見えます。 150と185を分離するためにおすすめのアガロース電気泳動のゲル濃度や、それら分子量の産物の分離をよくする工夫がありましたら、教えていただけませんでしょうか？ よろしくお願いします。

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