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(無題) 削除/引用 No.952-12 - 2011/09/26 (月) 11:00:19 - イーコリ 書き込み遅れてすみません。 30℃で16時間ほど培養したところ、問題なくplasmid抽出できました。 みなさん本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.952-11 - 2011/09/24 (土) 22:50:50 - ABZO 方法は何であれれ、要は取れれば言いのだから一度やってみればどうよ。2日あれば結果 わかるんだし。

(無題) 削除/引用 No.952-10 - 2011/09/24 (土) 15:17:51 - 細菌屋 大丈夫だと思いますよ。 私はいつも30℃で16-18H培養してプラスミドを採っています（5ml培地で総量2マイクロgくらいです）。

(無題) 削除/引用 No.952-9 - 2011/09/22 (木) 23:51:46 - 中年 37℃でオーバーナイト（16時間程度）培養は標準的な作法です。これで大腸菌のゲノムのコンタミが増えるとしたら、何か別の原因を疑うべきだと思います。

(無題) 削除/引用 No.952-8 - 2011/09/22 (木) 22:56:45 - シリウス 私は通常、37℃で16時間培養しています。 しかし、プラスミドに入っている遺伝子によっては、37℃で培養すると大腸菌が死ぬため、30℃で16時間で培養したりします。 ＞普段は37℃、8時間で行っているのですが、今回は培養時間を30℃、16時間（実験の都合でこのくらいの培養時間にしたい）くらいにしたいと考えています。 特に、問題はないと考えています。

(無題) 削除/引用 No.952-7 - 2011/09/22 (木) 21:55:12 - Harmonia ＞培養時間を長くする代わりに培養温度を低下させた そういう考え方があるのだと、初めて知った。 ＜あげあしとり

(無題) 削除/引用 No.952-6 - 2011/09/22 (木) 13:49:30 - う 一言。 別に37℃で１６時間カルチャーでも私はいいと思います。 大した手間じゃ無いと思うので、１回試して問題があったら考える で、いいのでは？そんな悩んでから行なう実験では無いと思いますが・・・。

(無題) 削除/引用 No.952-5 - 2011/09/22 (木) 12:59:29 - AP pUC系のoriのプラスミドの場合、コピー数の制御が温度感受性で、30℃位の低温になると細胞あたりのコピー数が少なくなります（というか、pBR系のoriの温度感受性mutantがpUC系oriなので、高温で数百コピーになる突然変異形質が、低温では本来のコピー数（数十コピー）にもどるというべきでしょうか）。

(無題) 削除/引用 No.952-4 - 2011/09/22 (木) 10:52:29 - xyz 私はやっています。 使っているホスト大腸菌と、増やしたいプラスミドにもよりますが。 ３７度で朝に培養を始めて、夕方ミニプレップするか、 ３２度で夕方培養を始めて、翌朝ミニプレップするか。 理由は、 ２〜３ｍＬで、３７度でオーバーナイトで培養すると、 培養時間が長すぎて、オーバーコンフルエントになり、 死んだ大腸菌のゲノム断片と思われるものまで よく抽出されてしまうからです。

(無題) 削除/引用 No.952-3 - 2011/09/22 (木) 09:41:37 - ~ 30℃ならば、おそらくはもう少し（24h位?）培養に時間がかかるかと思います。 そもそも、37℃でO/N��12〜18hくらい振ってプラスミドを増幅している人はいますが、何か特殊な培養条件なのでしょうか？ 単なるプラスミド増幅でないのであれば、その部分を明確にされてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.952-2 - 2011/09/21 (水) 19:22:27 - ンンノ プラスミド収量が減ります。 そのスケールの実験なら大量に取りたいわけではないでしょうから、問題ないと思いますが。

大腸菌の培養条件について 削除/引用 No.952-1 - 2011/09/21 (水) 18:30:45 - イーコリ plasmid抽出のため、大腸菌を3mLカルチャーで培養しようと思っています。 普段は37℃、8時間で行っているのですが、今回は培養時間を30℃、16時間（実験の都合でこのくらいの培養時間にしたい）くらいにしたいと考えています。 ここで皆さんに質問なのですが、このように培養時間を長くする代わりに培養温度を低下させたことはありますか。 また、ありましたら30℃、16時間という培養条件についてご意見を頂けたらと思います。 よろしくお願いします。

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