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(無題) 削除/引用 No.943-4 - 2011/09/21 (水) 09:40:23 - saya qq様，お返事をいただき，ありがとうございます． 使っているのは市販のキットではなく，市販の抗原・抗体類から系を作っています． ２）HRP標識抗原に未標識抗原は混ざっていませんか？ について，混在する非標識抗原があるのか（どの程度か）はわかりませんが，低濃度が定量できないというより，低濃度から高濃度までの標準曲線が寝ている（勾配が低い）ため，それを改善したいと思っています．非標識抗原の混在も，標準曲線の勾配に大きく影響してくるのでしょうか．もし他に可能性があることがあれば，教えてください． ３）第一抗体や第二抗体なしでバックグラウンドのシグナルはどの程度ですか？ についてですが，バックグラウンドの吸光値は0.05程度で，ブロッキングはうまくできていると判断しています．

(無題) 削除/引用 No.943-3 - 2011/09/20 (火) 22:48:38 - qq １）使っているのは、市販品のキットですか？ キットであれば、メーカーに聞くことです。 以下、キットではないとして、 ２）HRP標識抗原に未標識抗原は混ざっていませんか？ HRP標識抗原に混在する未標識抗原濃度以下の試料抗原を定量することは（おそらく）困難です。 ３）第一抗体や第二抗体なしでバックグラウンドのシグナルはどの程度ですか？ 非特異的吸着が多いようでしたら、ブロッキングの条件を検討します。

EIAの標準曲線 削除/引用 No.943-1 - 2011/09/19 (月) 16:30:56 - saya EIA（第2抗体固相化，競合法）である物質の濃度を測定するのに，標準曲線を書いています． これまでの経験から，第一抗体とHRP標識抗原の希釈倍率のバランスを変えることで，感度が変わり，より低濃度まで測れるようになっていました． 今回の検討でも，より低濃度まで測れる曲線になりつつありますが，標準曲線の勾配が小さく（寝ている），高濃度側でもっと下がるような曲線にしたいと思っています． 抗体や標識抗原をもっと薄くしてバランスを変えれば下がりが良くなると思うのですが，すでにEIAでの発色は0.3程度でかなり薄く，これ以上薄くしたくないと思っています． 寝ている標準曲線を立てるにはどうしたらよいか，どなたか同じような経験がある方がいらっしゃいましたら，教えてください． よろしくおねがいします．

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