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(無題) 削除/引用 No.891-11 - 2011/09/10 (土) 14:49:56 - 木村 本当にお二人ともありがとうございます！！ 抗サイトカイン抗体の間違いでした。すみません。 情報が少なすぎて申し訳ありませんでした。サイトカインは標識化しており、サンドイッチELISAとは書いてあります。 もう少し考えをまとめてからまた質問したいと思います。 お二人とも本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.891-10 - 2011/09/09 (金) 11:54:46 - ~ >抗サイトカインレセプター抗体−サイトカインでいいのではないか 結合させるだけならば抗サイトカイン抗体でも可能でしょう。 ただ、間に1個かませてはいけない理由も無いでしょう。 >わざわざFc融合タンパクを使ったのは、なぜなのかなと思ったんです。 リソースや目的を見ないとなんともいえません。 ●いい抗サイトカイン抗体が市場に無いなどの理由で、その時点で入手可能な材料で系を立ち上げた ●検出時に、使用しているFc融合タンパク質が持つ何らかの性質を使っている などはあるかもしれません。 >私の言い方が分かりにくくてすみません。 言い方というよりも、情報をあまり出していないのが問題でしょう。 持っている情報は始めから全て出した方が話が早いと思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.891-9 - 2011/09/09 (金) 11:13:04 - ats >抗サイトカインレセプター抗体−サイトカイン では、サイトカインは結合できないですよね。 プレート：抗サイトカイン抗体：サイトカイン の間違いでは？しかし、無標識だとすると、どのように検出するのでしょうか？ プレート：サイトカイン：抗サイトカイン抗体(検出）方式では、サイトカイン含量が微量なので検出は難しいです。 どちらにしても実験の目的が不明です（「解析」って便利な言葉ですが、具体的になに？）。 サイトカインの定量でしょうか？その場合サイトカインを標識してありますか？ 通常、サイトカインは微量なのでサンドイッチELISAなどを用いますが、２種の抗体がないと測定できません。そのため、片方をサイトカインレセプターFc融合タンパクで代用したとか？ それとも、サイトカインレセプターvsサイトカインの結合定数の測定でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.891-8 - 2011/09/09 (金) 10:51:31 - 木村 ~ さんありがとうございます。 私の言い方が分かりにくくてすみません。サイトカインレセプター.Fcのレセプター部分にそのサイトカインが結合するのは分かっていたのですが、プレート-抗体-(Fc部分-タンパク質部分)-サイトカインでなくても、抗サイトカインレセプター抗体−サイトカインでいいのではないかと考えてしまったんです。 わざわざFc融合タンパクを使ったのは、なぜなのかなと思ったんです。

(無題) 削除/引用 No.891-6 - 2011/09/09 (金) 09:06:52 - ~ >IgGは、レセプター.Fcをとらえるものだと書いてあったので、 サイトカインが何と結合するかも確認しましょう。 素直に考えると、Fc融合タンパク質のFc以外の部分と結合するのでは？ プレート-抗体-(Fc部分-タンパク質部分)-サイトカイン のように繋がっていると話が通ります。 （読まれている文献でそうなのかは確認が必要ですが）

(無題) 削除/引用 No.891-5 - 2011/09/08 (木) 16:33:53 - 木村 お二人ともすみません。 レセプター.FcをIgG抗体の後に入れて、その後にサイトカインを入れているといったものでした。まぎわらしく抗原と言ってしまってすみません。 IgGは、レセプター.Fcをとらえるものだと書いてあったので、IgGがFc部分とくっつくのかなと思いました。

または 削除/引用 No.891-4 - 2011/09/08 (木) 12:13:20 - ~ Fc融合タンパク質はスタンダードで、別のウェルにいれていませんか？ そうであれば、Fc配列が付くことで精製しやすくなるメリットがあります。

(無題) 削除/引用 No.891-3 - 2011/09/08 (木) 12:00:51 - ~ そのIgGは何と結合するもので、抗原は何と結合するのですか？ それが分かればFc融合タンパク質の立ち位置が分かるのでは。 実は抗原と呼んでいるものは抗原ではなく、そのFc融合タンパク質と結合するものだったりしませんか？

(無題) 削除/引用 No.891-2 - 2011/09/08 (木) 11:49:09 - ats > 最初にIgG抗体をプレートに入れたあとにFc融合タンパクを入れて、その後に抗原を入れていました。 意味不明です。IgG抗体は何を認識するのでしょうか？Fc融合タンパクとは抗原-Fcタンパクでしょうか？とすると競合ELISAを行っているのでしょうか？ 通常、Fc融合タンパクにすると、精製がProteinAカラム等で可能になる、分子量が大きくなるのでオリジナルと区別が付きやすい、2価になる(結合能があがるときがある）、運が良ければ安定になる等のメリットがあります。

Fc融合タンパク質 削除/引用 No.891-1 - 2011/09/08 (木) 11:33:02 - 木村 いつもお世話になっております。今回もどうぞよろしくお願いします。 ELISAで、Fc融合タンパクを使っている論文があったのですが、最初からそのタンパクの抗体を使わないのはなぜでしょうか？？ 最初にIgG抗体をプレートに入れたあとにFc融合タンパクを入れて、その後に抗原を入れていました。 その論文ではELISAで解析しているのがほとんどですが、最初から抗体を使って解析しているのもあります。 気になったのでよろしくお願いします。

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