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マウス血漿と血清が赤くなる原因について トピック削除
No.884-TOPIC - 2011/09/07 (水) 05:00:22 - kus
いつもお世話になっております。
私は、マウスから採血をし、血漿と血清を作成する実験をしております。
ところが、何回やっても血漿・血清が赤くなり、おそらく溶血しているのでは?と思っています。同じプロトコルでヒト血液でやった場合は、どちらも薄い黄色で、赤くなることはありません。
以下にプロトコルを書きます。

1匹のマウスから1ml採血する。(26G針、心臓採血)
10匹分集めて10ml全血を集める。
遠心を2回(2500rpm 10min, 3600rpm, 10min)し、多血小板血漿の分画と乏血小板血漿の分画を集める。(この時点ですでに赤い。遠心が甘いとかではない赤さである)
CaCl2を添加し、再度遠心。血清の分画をとる。

同じような実験をしている方、または何か改善点がありましたら、教えていただけましたら幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.884-5 - 2011/09/08 (木) 09:54:11 - kus
ご意見いただき、ありがとうございます。大変参考になりました。
レスが遅くなり申し訳ありません。
細い針で無理に吸引するのが溶血の原因になっている可能性があることがわかってきました。
再度チャレンジしてみたいと思います!

(無題) 削除/引用
No.884-4 - 2011/09/07 (水) 22:42:16 - AP
血液を吸引するとき、無理に引いて陰圧になると溶血します。
注射針はもっと太めがいいでしょう。また、針先が組織(心筋)を吸い付けて穴がふさがった状態で引かないように気をつけ、引く抵抗が高くなって吸い付けたと思ったら、少しピストンを押し戻して、針を少し引き上げて再開します。

大量に 削除/引用
No.884-3 - 2011/09/07 (水) 11:52:24 - ema
大量に集める(10匹)分処置してる間に壊れる事もあります。全く壊れない、、、ってことは無いのでそこはしょうがないとして。
私も採血はもう少し太く24G、外してチューブに。でエッペンに1匹づつの回収をしています。
遠心があまいの赤は血球である限りは白く白濁した赤になります。溶血だと透明で赤オレンジっぽいきれいな色ですので、細胞か溶けているのかは簡単に判ります。

(無題) 削除/引用
No.884-2 - 2011/09/07 (水) 06:18:08 - MAJOR
恐らく溶血だと思います。採血に26Gはやや細いかなぁという印象です。血液が針を通過するときに溶血しているかもしれません。

私は心臓採血で21G(1mLシリンジ)を使っています。血液を採取したら、針をはずしてからマイクロチューブに吐き出します。血液ができるだけ細い所を通らないようにしたほうが溶血を防げます。温度も低すぎると溶血します。

遠心はrcfまたはgで表記した方が客観的に判断しやすいです。rpmから想像するに極端に速くはなさそうですが。

マウス血漿と血清が赤くなる原因について 削除/引用
No.884-1 - 2011/09/07 (水) 05:00:22 - kus
いつもお世話になっております。
私は、マウスから採血をし、血漿と血清を作成する実験をしております。
ところが、何回やっても血漿・血清が赤くなり、おそらく溶血しているのでは?と思っています。同じプロトコルでヒト血液でやった場合は、どちらも薄い黄色で、赤くなることはありません。
以下にプロトコルを書きます。

1匹のマウスから1ml採血する。(26G針、心臓採血)
10匹分集めて10ml全血を集める。
遠心を2回(2500rpm 10min, 3600rpm, 10min)し、多血小板血漿の分画と乏血小板血漿の分画を集める。(この時点ですでに赤い。遠心が甘いとかではない赤さである)
CaCl2を添加し、再度遠心。血清の分画をとる。

同じような実験をしている方、または何か改善点がありましたら、教えていただけましたら幸いです。

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