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フローサイトの自家蛍光(培養細胞) トピック削除
No.879-TOPIC - 2011/09/06 (火) 13:29:47 - nimo
培養細胞(リンパ球)をフローサイトメーターで
解析しているのですが、
どうしても自家蛍光が出て、図が非常に格好が悪くなります。

2色で染色していますが、
ダブルネガティブ(左下集団)が、右上に向かって
トゲをのばしたような形になっています。
シングルポジティブ集団も、右上に向かって
少しのびています。

トゲ部分は、長いものではなく、集団がしずく型をしている
状態です。集団同士が離れているため、解析結果に影響はしないと
思いますが、格好が悪いです。

培養細胞でなければ、このようにはなりません。
(同条件、同細胞、同抗体使用)
初代培養からのフローサイトですが、溶血に問題は
ありません。

培養細胞のサンプルの調整法に問題があるのだと
思いますが、どうすればよいのでしょう??
 
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(無題) 削除/引用
No.879-3 - 2011/09/09 (金) 15:03:17 - nimo
ありがとうございます!

仰る通り死細胞の影響でした。
死細胞含む広めのエリアにgatingをかけていたため、
もっときつめにgete設定した所、改善しました。

今回は発注が間に合いませんでしたが、次回7-AAD使用
検討します。
適切な助言ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.879-2 - 2011/09/06 (火) 23:51:24 - FACS
きっとそれってgatingされてませんよね?

7-AADか何かで死細胞を除いてgatingしてますか?
あるいは、FACSでdot plotを表示されてる際に、Inspectorのgateってところが「No gate」のままではありませんか?つまり、dotがwhite dotのままでは?

gate 1を作製して、inspectorのgateってところを「G1」に変更するとred dotになるはず。

それだけでもそのようなノイズは消えますよ。
たぶんそれが原因かと想いますが如何でしょう?

フローサイトの自家蛍光(培養細胞) 削除/引用
No.879-1 - 2011/09/06 (火) 13:29:47 - nimo
培養細胞(リンパ球)をフローサイトメーターで
解析しているのですが、
どうしても自家蛍光が出て、図が非常に格好が悪くなります。

2色で染色していますが、
ダブルネガティブ(左下集団)が、右上に向かって
トゲをのばしたような形になっています。
シングルポジティブ集団も、右上に向かって
少しのびています。

トゲ部分は、長いものではなく、集団がしずく型をしている
状態です。集団同士が離れているため、解析結果に影響はしないと
思いますが、格好が悪いです。

培養細胞でなければ、このようにはなりません。
(同条件、同細胞、同抗体使用)
初代培養からのフローサイトですが、溶血に問題は
ありません。

培養細胞のサンプルの調整法に問題があるのだと
思いますが、どうすればよいのでしょう??

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