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(無題) 削除/引用 No.855-5 - 2011/09/01 (木) 12:25:47 - 染め初心者 有益な情報ありがとうございます。 私の目的は明確なファイバーの観察ではなく、 細胞の輪郭や足の観察です。 大変参考になりました。 確かに、ファイバー状に見える細胞を尊像しながら 293を見たために、あまり染まっていないという印象がすぎるのかもしれません。 精進してみます。

(無題) 削除/引用 No.855-4 - 2011/09/01 (木) 12:02:30 - ats 293細胞にEGFP-Actinを遺伝子導入して蛍光観察したところ、明瞭なストレスファイバーはほとんど観察できなかった経験があります。共焦点顕微鏡でやっと細い線維が多数絡み合っているような像が細胞内で観察できました＝通常の蛍光顕微鏡ではモヤッと見える。また細胞外周部や擬足あたりにやや強い蛍光が観察されました。なお、これらは遺伝子導入の結果で、直接Actinを染めているわけではないのでご注意ください。

(無題) 削除/引用 No.855-3 - 2011/09/01 (木) 08:27:12 - 染め初心者 ご助言ありがとうございます。 ホルマリン溶液は、パラホルムアルデヒドを溶かして作製しているので大丈夫です。 免疫染色と同時にやっていますので、免疫染色のブロッキングと兼ねて作業を進めるように ３％BSAでファロイジンを希釈して染めているのですが、これは問題ないですよね・・・。 細胞は293なので、染まりにくいことはないと思うのですが・・・。 精進してみます。

(無題) 削除/引用 No.855-2 - 2011/08/31 (水) 19:34:35 - TS 特に問題ないと思います。当方では、どちらも使用しますが、問題なく染まります。 単に重合アクチンが少ない細胞種と言うことではないのでしょうか。 市販のホルマリン溶液は使っていませんよね。メタノールのせいで、やや染まりが悪くなる傾向があると思いますので。

Phalloidin Alexaを用いた染色 削除/引用 No.855-1 - 2011/08/31 (水) 18:29:57 - 染め初心者 申し訳ありませんが、教えて下さい。 付着細胞をパラホルムアルデヒドで固定した後、 Tritonで処理してPhalloidin Alexaでアクチンを染めるときですが Phalloidinを希釈する液と染色後に洗浄に使う溶液に 免疫染色で使用しているTBST（tweenを含む）でPBSの代わりに 細胞を使っていいのでしょうか？ どうもPhalloidinでの染まり方があまり良くないので、 デタージェントが入りっぱなしというのはダメなのかと思いまして・・・。

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