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ありがとうございます 削除/引用 No.854-3 - 2011/09/01 (木) 09:15:42 - L 丁寧に教えて頂きましてありがとうございます 水道水でも問題ないのですね 浸透圧等は関係ないのでしょうか？（無視しても細胞に影響を与えないのでしょうか？） 核の染色にはヘマトキシリンを使用することに致しました 肝心の染色ですが、Oil Red O試薬を99.5%イソプロパノールに溶かしてストック液とし、使用前に「ストック：蒸留水=3:2」で混和した後、ろ紙で濾過して使用します 細胞を固定、洗浄した後に50%イソプロパノールに１分間つけた後、Oil Red染色液に15分間つけて染色します その後、50%イソプロパノールに１分間つけてから蒸留水で洗浄し、ヘマトキシリンで２分間染色、蒸留水で洗浄後水溶性の封入剤で封入します

(無題) 削除/引用 No.854-2 - 2011/08/31 (水) 22:59:34 - tani >細胞を洗浄する際はPBSで行うべきなのでしょうか？ >プロトコールによっては蒸留水で洗浄しているものもあります >浸透圧を考えると蒸留水で洗ってはいけないのではないでしょうか？ なんでもいいです、極端な話、組織なら水道水でも影響ありません。 >また、核染色にヘマトキシリンは使用できるのでしょうか？ 使えます。 >ヘマトキシリンは色出しに蒸留水を使用するとありましたが、 >どのくらいの時間蒸留水で色出しをすればよいのでしょうか？ ヘマトキシリンの色出しは基本的には流水水洗です、5分もあれば 充分です。 >Oil Redによる染色は初めてです 肝心の染色は大丈夫なんですか？

Oil Red O染色プロトコール 削除/引用 No.854-1 - 2011/08/31 (水) 17:24:35 - L 現在Oil Red O による脂肪滴の染色を検討中です 染色する細胞は脂肪滴を形成する脂肪細胞やマクロファージです 細胞をラブテックチャンバースライドにて培養し、4%PFAで固定後、染色を行う予定なのですが、染色手順に含まれる細胞の洗浄について質問です 細胞を洗浄する際はPBSで行うべきなのでしょうか？ プロトコールによっては蒸留水で洗浄しているものもあります 浸透圧を考えると蒸留水で洗ってはいけないのではないでしょうか？ また、核染色にヘマトキシリンは使用できるのでしょうか？ ヘマトキシリンは色出しに蒸留水を使用するとありましたが、どのくらいの時間蒸留水で色出しをすればよいのでしょうか？ Oil Redによる染色は初めてです アドバイスなどあればよろしくお願い致します

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