Bio Technical フォーラム

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組織免疫染色のときやる内在性PODブロックの件 トピック削除
No.839-TOPIC - 2011/08/27 (土) 05:53:15 - 教えてください。
組織の免疫染色で、内在性ペルオキシダーゼ(POD)を抑えるのにH2O2/MeOHが使われてますが、抗体と抗原の事情によりこの方法を避けたいと思います。そのためブロッキング〜１次抗体までを0.1% sodium azideを含むblocking 液（10%goat serum/PBS)を使ったところ、内在性のPODが抑えられたこともあり、そうでないこともあり結果が安定しません。似たような方法でされた人いたら経験を教えてください。
　
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No.839-5 - 2011/10/23 (日) 07:36:16 - Boston-Pullman
私はミリQ水で３％H2O2溶液を作っています（室温１０分）。廃液に気を使わなくていいので。

(無題) 削除/引用
No.839-4 - 2011/10/21 (金) 19:58:13 - KEN
http://www.funakoshi.co.jp/node/10949
上記を試されてはいかがでしょうか？
当方、最近は、メタノールをあまり使いたくないのと時間を短縮したいので、私はH2O2 3% 5minでブロッキングしています。
H2O2のみとメタノール混合ではあまり大差ないようです。

(無題) 削除/引用
No.839-3 - 2011/08/29 (月) 12:02:26 - るん
HRPではなく、ALPを用いたらいかがでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.839-2 - 2011/08/27 (土) 08:46:27 - 組織
一次抗体の後（二次抗体の前）にH2O2処理をすれば、抗原への影響を気にせずにPOブロックができます。白血球マーカーなどのCD抗原に対して用いられてきた方法です。

組織免疫染色のときやる内在性PODブロックの件 削除/引用
No.839-1 - 2011/08/27 (土) 05:53:15 - 教えてください。
組織の免疫染色で、内在性ペルオキシダーゼ(POD)を抑えるのにH2O2/MeOHが使われてますが、抗体と抗原の事情によりこの方法を避けたいと思います。そのためブロッキング〜１次抗体までを0.1% sodium azideを含むblocking 液（10%goat serum/PBS)を使ったところ、内在性のPODが抑えられたこともあり、そうでないこともあり結果が安定しません。似たような方法でされた人いたら経験を教えてください。
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