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(無題) 削除/引用 No.828-7 - 2011/08/25 (木) 17:31:33 - ats 非特異結合を減らすと特異結合クローンも減るけど、結合力の強いものほど残るとも考えられます。その件の兼ね合いを測りながら(というか試行錯誤）パンニングしましょう。頑張ってください。 もっともどの辺で諦めるかも重要かつ難しい問題です。

(無題) 削除/引用 No.828-6 - 2011/08/25 (木) 17:23:13 - ats > 疎水結合が強化されるとどういうことに結びつくのですか？ パンニングの原理は２種あるいはそれ以上の分子の結合・相互作用を利用してスクリーニングすることですよね。その結合の様式(疎水結合・イオン結合・分子間力・水素結合など）を考えてください。うまく行かない場合は、闇雲にマニュアルにしたがってTBS-Tで洗浄するのでは工夫がなさすぎですよ。

(無題) 削除/引用 No.828-5 - 2011/08/25 (木) 15:46:03 - hohoho 早速のご回答ありがとうございます。 atsさん > 塩濃度が高いと、イオン結合が阻害されると同時に疎水結合を強化します。 > detergent濃度が高いと、疎水結合を阻害します。 疎水結合が強化されるとどういうことに結びつくのですか？ ~さん > Tweenの濃度が高い Tweenは0.05％です。1×のときも10×のときもトータルの液量に対してこの割合です。

(無題) 削除/引用 No.828-3 - 2011/08/25 (木) 14:44:50 - ~ 塩濃度が高いことによる抗体と抗原の結合能の変化 塩濃度が高いことによりる抗原の変性 Tweenの濃度が高い（以下略

(無題) 削除/引用 No.828-2 - 2011/08/25 (木) 14:40:26 - ats 塩濃度が高いと、イオン結合が阻害されると同時に疎水結合を強化します。 detergent濃度が高いと、疎水結合を阻害します。 バイオパンニングにおいて10xTBS-Tでも回収されたファージ（かな？）がそれなりにいれば非特異的吸着を減らしているので、問題ないと思います。 非特異的な吸着を解決するにはTween20以外のdetergentが有効なこともあります。 ただし、高濃度の洗浄液がその後の大腸菌に悪さする場合があるので、最後はTBS等で洗浄した方がよいかもしれません。

洗浄液TBSTの濃度による影響 削除/引用 No.828-1 - 2011/08/25 (木) 12:25:49 - hohoho ELISAではないですが、バイオパンニングというプレートにコーティングした抗体分子と抗原となる溶液とを反応させ特異的濃縮を行う操作を行っています。 本来は1×TBSTで洗浄操作を行うのですが、最近TBSが新しくなって、恥ずかしながら、1×ではなく10×TBSTで洗浄を行っていたことに今気づきました。 この濃度の違いによる影響で考えられることは何でしょうか・・・。 ちなみにこのバイオパンニングの操作は非特異的な吸着が多く、上手くいったことがありませんでした。1×でも10×でも芳しい結果が得られていません。

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