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マウスの脳 電顕の固定 トピック削除
No.804-TOPIC - 2011/08/20 (土) 10:05:12 - マンゴ
電顕初心者です。

マウスの脳を用いて電顕を行っているのですが、
固定について悩んでます。
4パーセントホルマリン(ホルマリン液よりPBSで薄めて作成)にて還流固定
して、4パーセントホルマリンにて1時間つけて、凍結切片を作ってます。

そして、前固定として、二分の一カルウノフスキーを8時間
後固定として1%オスミウム固定を30分しています。

あまり、キレイな組織が見えません。
何を変えたら良いでしょうか?

また、エポン重合後に、スライドガラスの方に組織が残ってしまうことがあります。
何が原因なんでしょうか?

何かお気づきになる点があったら教えてくださ。
 
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(無題) 削除/引用
No.804-3 - 2011/10/28 (金) 17:25:49 - 留学したことないですが
私が電顕をしてたときは4%PFA(パラフォルムアルデヒド)+
2.5%GA(グルタルアルデヒド)/PBSを使ってましたよ。

(無題) 削除/引用
No.804-2 - 2011/08/21 (日) 12:13:24 - 組織
目的は電顕?それとも免疫電顕でしょうか?
それによってコメントも変わってくると思います。

ともかく気になるのは
>4パーセントホルマリン(ホルマリン液よりPBSで薄めて作成)

原液ホルマリン=約38%のホルムアルデヒド液なので、10%ホルマリン=約4%ホルムアルデヒド液となり、これが通常使われる固定液です。ホルマリンを4%になるように希釈したりしてませんよね?

また、ホルマリンの緩衝液はPBSよりもPB(リン酸緩衝液、pH7.4)の方が形態保持性が高いと言われています。

電顕は経験者がいないと難しい面がありますので、近くに形態学専門のラボがあれば相談に行かれるのが一番です。少なくとも、まずは基本的な技術書を一通り勉強された方がいいでしょうね。

マウスの脳 電顕の固定 削除/引用
No.804-1 - 2011/08/20 (土) 10:05:12 - マンゴ
電顕初心者です。

マウスの脳を用いて電顕を行っているのですが、
固定について悩んでます。
4パーセントホルマリン(ホルマリン液よりPBSで薄めて作成)にて還流固定
して、4パーセントホルマリンにて1時間つけて、凍結切片を作ってます。

そして、前固定として、二分の一カルウノフスキーを8時間
後固定として1%オスミウム固定を30分しています。

あまり、キレイな組織が見えません。
何を変えたら良いでしょうか?

また、エポン重合後に、スライドガラスの方に組織が残ってしまうことがあります。
何が原因なんでしょうか?

何かお気づきになる点があったら教えてくださ。

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