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組織でウエスタンのバンドの高さが違う トピック削除
No.79-TOPIC - 2011/02/27 (日) 21:25:29 - fff
お世話になっております。

ウエスタンで、あるタンパク質が心臓で発現しているかどうかを見ています。
このタンパク質は腎臓で発現が多いので、それをポジコンとしています。

それらしいバンドが見られるのですが、分子量が少しだけ(5-10 kDa)心臓の方が高いです。
一次抗体を抜いたらバンドが出ないことは確認しています。

ペプチドブロッキングで本当のバンドかを確認する必要があるかと思いますが、組織によってバンドの高さが変わるというこの現象はあり得るのでしょうか?

ご教示いただけたら幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.79-6 - 2011/03/02 (水) 12:56:29 - SRT
バンドの高さが違うことあります。
神経組織 vs 培養神経細胞、ラット組織 vs マウス組織、マウス組織A vs マウス組織Bなどで経験しました。

(無題) 削除/引用
No.79-5 - 2011/02/28 (月) 19:30:54 - TS
他の方がおっしゃっているように、
alternative splicing、修飾(糖鎖、リン酸化)があり得ると思います。

質問の主旨とは異なりますが、現象を考察すれば、
実は心臓には目的タンパク質は発現しておらず、まったく別のタンパク質にたまたま抗体が反応してしまっていてということもあり得ますね。

発現を確認したいというのが目的のようですので、PCRも併用してみてはいかがでしょう。遺伝子レベルの発現量の違いも見れますし。

(無題) 削除/引用
No.79-4 - 2011/02/28 (月) 19:08:38 - 実験大好き−2
ただしこれは膜蛋白の場合です。

(無題) 削除/引用
No.79-3 - 2011/02/28 (月) 19:07:23 - 実験大好き
組織によって、糖鎖が異なるとか・・・。

(無題) 削除/引用
No.79-2 - 2011/02/27 (日) 21:50:09 - Boston-Pullman
alternative splicing じゃないですかね

組織でウエスタンのバンドの高さが違う 削除/引用
No.79-1 - 2011/02/27 (日) 21:25:29 - fff
お世話になっております。

ウエスタンで、あるタンパク質が心臓で発現しているかどうかを見ています。
このタンパク質は腎臓で発現が多いので、それをポジコンとしています。

それらしいバンドが見られるのですが、分子量が少しだけ(5-10 kDa)心臓の方が高いです。
一次抗体を抜いたらバンドが出ないことは確認しています。

ペプチドブロッキングで本当のバンドかを確認する必要があるかと思いますが、組織によってバンドの高さが変わるというこの現象はあり得るのでしょうか?

ご教示いただけたら幸いです。

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