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(無題) 削除/引用 No.756-4 - 2011/08/05 (金) 23:33:23 - boston ありがとうございます。 -10度程度まで下げて、もう一度トライしたいと思います。 確かに、液体窒素に10分程度つけていました。 OCTのトリミングもやってみたいと思います。 また、質問させてください。

(無題) 削除/引用 No.756-3 - 2011/08/05 (金) 22:35:02 - tani ＞クライオスタットで切片作成時にOCTコンパウンドがぱさぱさになり組織が壊れてしまいます。 この原因の多くは液体窒素を使って凍結させたのではなく、長々と液体窒素の中に漬けた結果、OCTが割れるのが原因です。凍結時間はだいたい10秒くらいで一度様子をみます、それでも不足かな、と思ったら5秒ほど延長します。多少凍結不足でも、何て言ったらいいのか、余熱の逆で余冷で凍ります。 それでもへたするとOCTコンパウンドが切っているとパラパラになりますので要注意です。 PFA で固定しているのならあわてて凍結にする必要はないかもしれませんから、クリオスタットの庫内で凍らせてもいいかと思います。 それと、No.732-2 - 2011/08/02 (火) 12:47:42　にも書きましたがOCTコンパウンドは基本的には薄切には邪魔なものですから、使用は最小限に、切るときもOCTはトリミングすると切り易くなります、お試しください。

(無題) 削除/引用 No.756-2 - 2011/08/05 (金) 07:25:58 - 組織 切片がパサパサになるのは、クリオスタット庫内の温度が低すぎるときが多いです。温度を上げたら切れるかもしれません。段階的に-10度くらいまで上げてみたらどうでしょうか。

新鮮凍結切片 削除/引用 No.756-1 - 2011/08/05 (金) 03:27:34 - boston 　マウスの心臓をPFA固定後、スクロース処理しOCTコンパウンドで凍結切片を作りました。液体窒素を用いて急激に凍結させたためか、クライオスタットで切片作成時にOCTコンパウンドがぱさぱさになり組織が壊れてしまいます。 一度、常温に戻してドライアイスを用いてゆっくり再凍結させると綺麗にカットできるのですが、組織が壊れていました。 OCTコンパウンドを急激に液体窒素内で凍結させたのがいけなかったのだと思いますが、どなたか組織の形態を保ったまま、このトラブルを抜け出る方法をご存知の方いましたら、御教授ください。

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