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(無題) 削除/引用 No.732-5 - 2011/08/04 (木) 12:41:08 - S tani様： 返事が遅くなりました。すみません。 そうですか、１回くらいのやりなおしは、大丈夫そうなのですね。 もう一度、切ってみて、やはり包埋しなおしたほうが良さそうであれば、 やってみます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.732-4 - 2011/08/02 (火) 15:31:48 - tani ＞ちなみに、いったん包埋したものを融解して ＞包埋しなおすというのは、良くないですよね？ ＞ホルマリン固定組織とはいえ、形態がかなり崩れますか？ 一度、固定したものですから、何度も凍結、融解を繰り返さなければ 普通はだいじょうぶですよ。

(無題) 削除/引用 No.732-3 - 2011/08/02 (火) 14:13:56 - S tani様： ありがとうございました。 やはり組織がOCTに十分になじんでいないのが要因の１つの可能性が高いのですね。今後は、少しなじませてから凍結させるように気をつけます。 ちなみに、いったん包埋したものを融解して 包埋しなおすというのは、良くないですよね？ ホルマリン固定組織とはいえ、形態がかなり崩れますか？ このような経験はあまりないかとは思いますが、ご意見を頂けると助かります。

(無題) 削除/引用 No.732-2 - 2011/08/02 (火) 12:47:42 - tani 消化管とOCTはなかなか馴染みませんね、苦労するところです。 腸は輪切りですか、それとも開いて長軸方向で切っていますか。 輪切りなら管腔の中にもOCTを十分に入れてください。内と外にも十分にOCT が浸かるようにです。凍らせ方は自由です。凍らせた後ですが、基本的にOCTコンパウンドは薄切には邪魔なものですから必要最小限までトリミングしてください。温度は-15〜-20度くらいでよいでしょう。 これで組織がスパスパ切れて、きれいな切片がどんどん回収できるわけではありませんが、少なくとも今の苦労よりはマシな切片が回収できると思います。

ラット腸の凍結薄切り切片 削除/引用 No.732-1 - 2011/07/29 (金) 22:25:31 - S いつも勉強させてもらっております。ご助言よろしくお願いします。 ラット腸の凍結切片を以下の工程で作成しておりますが きれいに切れないことが多く、苦労しております。 １．ホルマリン固定（一晩） ２．３０％スクロースに置換（一晩） ３．包埋（OCT:20% sucrose=2:1)。液体窒素にフローターを浮かべて、凍結。 ４．−１７度で薄切り（クライオスタット） 苦労しているところですが、クライオスタットで切るとき、OCTコンパウンドの部分は、うまく切れるのですが、切った時に組織がしわになったり、OCTからはずれてつぶれてしまったりします。 （表現がわかりにくかったらすみません） OCTの部分と一緒にうまく切れてくれれば、良い切片が作れそうなのですが、このトラブルの原因としては、どのようなことが考えられるのでしょうか。 私としては、次の２点が少し気になっているところです。 １．OCTと組織がよくなじんでいない（液体窒素をつかっているから？） ２．薄切りの時の温度が高い(-20度くらいの方がよいか？） わたしの技術不足は重々承知ですが、この状況から改善できそうな点を教えていただければと思い、投稿いたしました。 よろしくお願いします。

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