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培養細胞からのRNA抽出 トピック削除
No.722-TOPIC - 2011/07/28 (木) 10:27:15 -
接着培養細胞からのRNA抽出について熟練者のみなさまに2点お尋ねしたいです。
@培養細胞に直接ISOGENなどを添加し溶解液をチューブに回収するときにセルスクレーバーなどで掻き取りますでしょうか?もしくは何もせずにピペットチップでのみ回収しますか?
A溶解液をチューブに回収後に注射針などで出し入れし、RNA抽出のためにDNAきりをしますか?

私個人は特にセルスクレーバーも注射針も使用せずにRNA抽出できているのですが、使った方がもっと純度よくとれるのかとか気になったので質問させていただきました。使用している細胞にもよるとかもあるかもしれませんが。よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.722-4 - 2011/08/01 (月) 12:31:23 - 春咲子紅
純度は抽出工程の問題なので、関係ないんじゃない?

スクレーパーを使用したほうがボリュームはたくさんとれるようになりますよ。

(無題) 削除/引用
No.722-3 - 2011/08/01 (月) 09:47:20 - ~
現時点で何が問題になっていて、何を解決したいのでしょうか?

@
基本的には使っています。
ただ、サンプル数が多い場合に、経費の都合で使用を諦めることがあります。

A
やっています。

>もっと純度よくとれるのか
少なくとも@は収量に影響はあっても、純度には影響しないと思いますが。

Aは、DNAのコンタミが起きていて問題になっているのであれば、検討してもいいと思います。
純度というのがたんぱく質のコンタミの話であれば、DNAを切るよりも、フェノクロを追加で1回振ったほうがいいと思います。
収量ではなく純度が問題になるのであれば、中間層から離れている部分だけとれば、DNA、タンパク質を吸い込む量も減るでしょう。

(無題) 削除/引用
No.722-2 - 2011/07/28 (木) 12:58:13 - おお
粘どがさはほど高くない場合は両者しません、スクレイパーは場合によってはディッシュのうえで膜が張ったようになって完全に溶解し切れない場合がありますのでその場合はします。

ぴペッティングでねん度がほとんどなくなるようだったらニードルも使いませんが、DNAをよくほぐした方が収量がいいのは確かです。

培養細胞からのRNA抽出 削除/引用
No.722-1 - 2011/07/28 (木) 10:27:15 -
接着培養細胞からのRNA抽出について熟練者のみなさまに2点お尋ねしたいです。
@培養細胞に直接ISOGENなどを添加し溶解液をチューブに回収するときにセルスクレーバーなどで掻き取りますでしょうか?もしくは何もせずにピペットチップでのみ回収しますか?
A溶解液をチューブに回収後に注射針などで出し入れし、RNA抽出のためにDNAきりをしますか?

私個人は特にセルスクレーバーも注射針も使用せずにRNA抽出できているのですが、使った方がもっと純度よくとれるのかとか気になったので質問させていただきました。使用している細胞にもよるとかもあるかもしれませんが。よろしくお願いします。

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