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リコンビナントタンパク質の保存 トピック削除
No.702-TOPIC - 2011/07/23 (土) 03:03:20 - #k#r#
現在所有しているリコンビナントタンパク質(アポリポタンパク質)が下記のような状態です。

・乾燥重量で1.5mg程度の量
・100mM ammonium bicarbonate, 10mM DDT Bufferに溶けており冷蔵保存

実験に使用する迄の保存に際してグアニジン塩酸塩を6Mにまで加えて凍結保存するのがよいとどこかで聞いたことがあるのですが、このような処理は一般的なのでしょうか?

もし一般的である場合、使用直前に希望のバッファーで透析をすることになると思いますが、その際、タンパク質がアグってしまったりする事はありますでしょうか?

宜しく御願い致します。
 
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どこかで? 削除/引用
No.702-6 - 2011/07/24 (日) 23:28:55 - 小言幸兵衛
「どこかで」ってどのレベルで確からしいことなのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.702-5 - 2011/07/24 (日) 21:50:54 - #k#r#
皆様

御助言ありがとうございます。
私自身、グアニジン塩酸塩は変成剤という認識しかなく、このような操作をしてよいものかどうか、自信がありません。

リオンビナント蛋白質がアポタンパク質なのですが、このことで何か特別な理由があるのかもしれないと思い、いろいろ調べている途中です。

また、コメントいただけますと幸いです。

(無題) 削除/引用
No.702-4 - 2011/07/23 (土) 18:30:49 - カイ
グリセロールを10〜50%足すとか、液体窒素で即冷凍のほうが活性を保って保存できるのでは?

グアニジン塩酸塩を保存に使うのは聞いたことがないですが。

(無題) 削除/引用
No.702-3 - 2011/07/23 (土) 14:25:49 - おお
>[Re:1] #k#r#さんは書きました :
0mM ammonium bicarbonate, 10mM DDT Bufferに溶けており冷蔵保存
>
> 実験に使用する迄の保存に際してグアニジン塩酸塩を6Mにまで加えて凍結保存するのがよいとどこかで聞いたことがあるのですが、このような処理は一般的なのでしょうか?

一般的ではないと思います。

(無題) 削除/引用
No.702-2 - 2011/07/23 (土) 07:23:07 - ats
グアニジン塩酸は、高次構造を破壊しタンパクを変性させますよ。

リコンビナントタンパク質の保存 削除/引用
No.702-1 - 2011/07/23 (土) 03:03:20 - #k#r#
現在所有しているリコンビナントタンパク質(アポリポタンパク質)が下記のような状態です。

・乾燥重量で1.5mg程度の量
・100mM ammonium bicarbonate, 10mM DDT Bufferに溶けており冷蔵保存

実験に使用する迄の保存に際してグアニジン塩酸塩を6Mにまで加えて凍結保存するのがよいとどこかで聞いたことがあるのですが、このような処理は一般的なのでしょうか?

もし一般的である場合、使用直前に希望のバッファーで透析をすることになると思いますが、その際、タンパク質がアグってしまったりする事はありますでしょうか?

宜しく御願い致します。

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