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DNA電気泳動
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No.678-TOPIC - 2011/07/15 (金) 13:05:52 - ozawa
アガロースゲルでDNAを電気泳動する場合、
1ウェルあたりに何マイクログラムのDNAをアプライすれば
十分にバンドが見えるのでしょうか?
ゲルに流して回収したDNAをもう一度ゲルに流して、本当にきちんと回収できたか確認したいのですが、どれくらいアプライすればいいのかと思いまして。
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No.678-4 - 2011/07/19 (火) 08:53:20 - ~
回収率は低めに見積もっておきましょう。
100%回収できていると思って検出限界ぎりぎりで流すと、検出できないかもしれません。
(無題)
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No.678-3 - 2011/07/15 (金) 18:03:48 - AP
観察の方法や観察装置の性能にもよると思いますが、EtBr染色、紫外線照射で観る場合、一バンド1-2 ng程度のDNAというのが下限とされているところでしょう。もちろん、紫外線イルミネータがしょぼければそこまでいかないだろうし、Cybr Greenなど、より好感度の染色剤や、レーザースキャナなどを使えばもっといきます。
実用上は、一バンド10 ng以上あれば確実に観察できるでしょう。
ただ、コンタミしているかもしれない、少量のDNA断片の有無を確認するような場合なら、それなりに量が必要です。
(無題)
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No.678-2 - 2011/07/15 (金) 14:09:16 - マ
0.1μg流せば十分見えます
DNA電気泳動
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No.678-1 - 2011/07/15 (金) 13:05:52 - ozawa
アガロースゲルでDNAを電気泳動する場合、
1ウェルあたりに何マイクログラムのDNAをアプライすれば
十分にバンドが見えるのでしょうか?
ゲルに流して回収したDNAをもう一度ゲルに流して、本当にきちんと回収できたか確認したいのですが、どれくらいアプライすればいいのかと思いまして。
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