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培養中のコンタミ トピック削除
No.660-TOPIC - 2011/07/11 (月) 10:45:18 - mina
マウス肝細胞を培養しているのですが
先日コンタミしてしまい染色したところグラム陽性菌でした。

予備の細胞株がないので、なんとかこの細胞を
使いたいのですが何か方法はありますでしょうか。

現在、培地に10%の割合でペニシリン-ストレプトマイシンを
添加しています。

よろしくお願いします!
 
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(無題) 削除/引用
No.660-5 - 2011/07/11 (月) 18:41:08 - mAb
クローニングができる細胞株ならば、96wellプレートで限界希釈を実施してもいいかもしれません。
ただし、除染後の細胞株で得られた実験データに信用性があるかというと問題になる可能性もあります。
再入手の方法も考えておいた方が良さそうです。

(無題) 削除/引用
No.660-4 - 2011/07/11 (月) 16:05:17 - おお
http://www.invivogen.com/family.php?ID=4
こんなのもあるね。
ゲンタマイシンとカナマイシン、テトラサイクリンなどこうせい物質総動員という感じでうんがよければ駆除はできるかと思いますが。。。

ありがとうございます 削除/引用
No.660-3 - 2011/07/11 (月) 12:25:59 - mina
上司の研究を手伝っている者です。
他に院生etcはいません。

もちろん上司には報告済みです。
洗浄をまめにして様子を見ることになっています。
コンタミがわかった時点で庫内の消毒もしました。

あと、インキュベーター内はこのディッシュのみで
他に培養しているものはありません。



ディッシュのふちですね、盲点でした。
抗生剤抜きのものも培養してみます。

併せて他の抗生剤も検討してみようと思います。

ありがとうございました。

先日とはいつで、今はどの状態? 削除/引用
No.660-2 - 2011/07/11 (月) 11:27:22 - ~
まず最初に、貴方はどのような立場で、ラボのインフラの管理はどうなっているのでしょか?

貴方がコンタミした細胞を維持しようとしたために、ラボの共有機器が汚染され被害が広がった場合、卒業が遅れる院生さんが出てくるかもしれません。
最低でも貴方のボスと、同じ部屋を使っている人たちには状況は伝えておきましょう。
ボスの判断で、それを廃棄し、汚染されていない細胞を使って実験するように指示されるかもしれません。

ボスの許可がでた上の話として、
効果のある抗生物質を探している状況ではないでしょうから、用意できるものを入れましょう。
カナマイシンやゲンタマイシンもグラム陽性菌に効く場合があります。
毎日最低1回はPBSでディッシュを十分に洗って菌を少しでも減らし、その上で抗生物質入りの培地を入れましょう。

ディッシュの"ふち"についている可能性もありますので、適当なタイミングで新しいディッシュに継代しましょう。
そのときに、抗生物質抜きの培地のディッシュも作っておくと、菌が抜けたかが分かります。

培養中のコンタミ 削除/引用
No.660-1 - 2011/07/11 (月) 10:45:18 - mina
マウス肝細胞を培養しているのですが
先日コンタミしてしまい染色したところグラム陽性菌でした。

予備の細胞株がないので、なんとかこの細胞を
使いたいのですが何か方法はありますでしょうか。

現在、培地に10%の割合でペニシリン-ストレプトマイシンを
添加しています。

よろしくお願いします!

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