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(無題) 削除/引用 No.630-3 - 2011/07/12 (火) 14:13:56 - GGG お返事ありがとうございます。 発現は必ずしており(internalcontrolです)他の方と同じ抗体をつかっています。 またpermializationですが腸管実験の専門書に載っていたプロトコールを用いています。

(無題) 削除/引用 No.630-2 - 2011/07/06 (水) 19:31:48 - TS 他の組織で染まっているのであれば、その腸には発現していないか、染めれるほどはないのではないですか？ 十分にある、という前提でしょうか。 染めることのできる組織との発現量の差を、IBなどで確認されましたか？ また、他の組織で染められていると言うことなので、実質的に問題ないとは思いますが、Permeabilizationが長いですね。 切片なので、Permeabilizationが必要ないことが多いとも思いますし、 やっても5-10分くらいで十分だと思うのです。

マウス腸管の抗体蛍光染色 削除/引用 No.630-1 - 2011/07/06 (水) 18:49:30 - GGG はじめまして。実験初心者です。 現在成体のマウスの腸管上皮の抗体染色を行っていますが、全く染まりません。抗体については他の組織や胎生期(e9.5)の腸では染まります。 簡単にプロトコルを書きますと、 腸管を摘出後、PBSにて裁断し上皮側をPBSで洗い、4%PFAで4℃、一晩固定する。 その後凍結切片を作成し-80℃保存。 染色の手順は PBSで２回洗い、0.3%triton,1hrを室温で処理し、Blocking Oneでブロッキングし 4℃で一晩抗体反応。 翌日PBSで洗い、二次抗体を室温で1時間反応させる。 その後PBSで洗う。 よろしくお願いします。

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