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ありがとうございます 削除/引用 No.619-9 - 2011/07/06 (水) 15:27:26 - aiueo >[Re:8] APさん: > 水で希釈したらどうでしょうか。 > HE染色でEosins染色を施す方法として、ヘマトキシリン染色、水洗、弁色後のアップシリーズの70%エタノール中でやる方法と、アップシリーズの前に0.5%程度のエオシン水溶液で短時間（30秒程度）する方法があります。私は後者の方法でしかやったことありません。 私が現在使用しているエオジン液には「95％メタで5倍希釈」と記載されているのですが、一度蒸留水で5倍希釈も試してみます。 >[Re:7] 組織さん: > 他の方も言われてますが、エタノールではなく、メタノールを使っているのが常法と違うところでしょうか。今までは問題なかったとのことなので、これが原因かはわかりませんが・・ > > エオジンはアルコールで脱色するものなので、多少の色落ちはするものですが、急激に色が抜けてしまうということですよね？ そうです。急に色が抜けてしまい、最終的にはヘマトキシリンのみで染色したような標本になってしまいます。 エタノールの使用も一度試してみます。 皆様、毎回親切なご回答ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.619-8 - 2011/07/06 (水) 15:03:18 - AP >エオジンは武藤化学株式会社の「ピュア・エオシン液」を95％メタで5倍希釈したものを使用しています。 水で希釈したらどうでしょうか。 HE染色でEosins染色を施す方法として、ヘマトキシリン染色、水洗、弁色後のアップシリーズの70%エタノール中でやる方法と、アップシリーズの前に0.5%程度のエオシン水溶液で短時間（30秒程度）する方法があります。私は後者の方法でしかやったことありません。

あとは 削除/引用 No.619-7 - 2011/07/06 (水) 14:28:48 - 組織 他の方も言われてますが、エタノールではなく、メタノールを使っているのが常法と違うところでしょうか。今までは問題なかったとのことなので、これが原因かはわかりませんが・・ エオジンはアルコールで脱色するものなので、多少の色落ちはするものですが、急激に色が抜けてしまうということですよね？

ありがとうございます 削除/引用 No.619-6 - 2011/07/06 (水) 13:41:26 - aiueo >[Re:5] 組織さん: > エオジンがへたっているのでしょうか。作り直すか、数時間漬けっぱなしにして染めてみてはどうでしょう？（エオジンは基本的にゆっくりとしか染まらないので、放置しても大丈夫です） エオジンは２週間に１度の回数で交換しています。 ですので、へたっているということは考えにくいと思います。 また、丸１日エオジン層に浸けてみましたが、やはり無水メタ層で色落ちしてしまいました。 >[Re:4] taniさん: > 当方はこれでやっています、おそらくエオジンが悪いのでしょう、 > 自作なら市販品を使ってみてください、市販にはかないません、 > だめなら責任とってくれますよ。 エオジンは武藤化学株式会社の「ピュア・エオシン液」を95％メタで5倍希釈したものを使用しています。 以前からこちらの染色液を使用しておりましたし、先輩方もこの染色液で綺麗に染められていました。 私としましては、エオジン液が悪いのではないと思います。 >[Re:3] 名無しさん: > アルコールはうちはメタノールでなくエタノール使ってます。特に色落ちとかで困ったという話は出てません。 エタノールですね。参考にさせていただきます。 >[Re:2] 野良ジョーンズさん: > エオジンに酢酸入れてますか？エオジンは酸性の方が染まりやすいので、入れると染色性が大幅に改善することがあります（100mlにつき1~2滴くらい。沈殿が生じることがありますが問題なく染まりました）。ただし、酸性条件下に長くおいておくとせっかく青く色出ししたヘマトキシリンが赤っぽくなってしまい、エオジンと区別がつきにくくなるので染色時間は短め（5分以内）にした方が良いです。 なるほど。酢酸ですか。 エオジン液に酢酸は滴下しておりません。一度試してみます。 皆さん親切なご回答ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.619-5 - 2011/07/05 (火) 08:02:08 - 組織 エオジンがへたっているのでしょうか。作り直すか、数時間漬けっぱなしにして染めてみてはどうでしょう？（エオジンは基本的にゆっくりとしか染まらないので、放置しても大丈夫です）

(無題) 削除/引用 No.619-4 - 2011/07/05 (火) 02:31:08 - tani キシレン I ５分 キシレン II ５分 キシレン III ５分 エタノール 100% I　3分 エタノール 100% II 3分 エタノール 100% III 3分 エタノール 90% 3分 エタノール 70％ 3分 流水水洗 ヘマトキシリン 7分 （テッシュ・ティック　ヘマトキシリン 3G) 流水水洗　 10分程度 エオジン　5分（テッシュ・ティック　エオジン) エタノール 70％ 　軽くジャブジャブと５秒程度 エタノール 90%　 軽くジャブジャブと５秒程度 エタノール 100% I　軽くジャブジャブと５秒程度 エタノール 100% II 軽くジャブジャブと５秒程度 エタノール 100% III 3分程度 キシレン I ３分 キシレン II ３分 キシレン III ３分 封入 当方はこれでやっています、おそらくエオジンが悪いのでしょう、 自作なら市販品を使ってみてください、市販にはかないません、 だめなら責任とってくれますよ。

(無題) 削除/引用 No.619-3 - 2011/07/04 (月) 22:37:42 - 名無し アルコールはうちはメタノールでなくエタノール使ってます。特に色落ちとかで困ったという話は出てません。

(無題) 削除/引用 No.619-2 - 2011/07/04 (月) 16:34:55 - 野良ジョーンズ エオジンに酢酸入れてますか？エオジンは酸性の方が染まりやすいので、入れると染色性が大幅に改善することがあります（100mlにつき1~2滴くらい。沈殿が生じることがありますが問題なく染まりました）。ただし、酸性条件下に長くおいておくとせっかく青く色出ししたヘマトキシリンが赤っぽくなってしまい、エオジンと区別がつきにくくなるので染色時間は短め（5分以内）にした方が良いです。

HE染色 削除/引用 No.619-1 - 2011/07/04 (月) 15:45:28 - aiueo 初めまして。 現在大学の研究室でイヌ卵巣を用いてHE染色を行っているのですが、 エオジン染色後の脱水の過程で無水メタノール層につけると 色が抜け出てしまいます（特にエオジン色素）。 その為に、出来上がった組織標本はHE染色独特の紫色ではなく、 真っ青に近い紫色になってしまいます。 以下が私の研究室でのHE染色のプロトコルです。 キシレン（２〜３回つける） キシレン（〃） キシレン（〃） メタノール１００％（〃） メタノール９５％（〃） メタノール９０％（〃） メタノール７０％（〃） 水道水で洗う ヘマトキシリン（２分３０秒） 水道水で洗う（３０分／１０分毎に揺らす） エオジン（１０分） メタノール９５％（２〜３回つける） メタノール９９％（〃） 無水メタノール（１分） 無水メタノール（〃） 無水メタノール（〃） キシレン（３分） キシレン（〃） キシレン（〃） 何故、無水メタノール層に入れたときにかなり色落ちするのかが 全く見当がつかない状態です。 ちなみに先代の方が上記と同じ手法でHE染色をやっていましたが 綺麗に染色されていました。 まとまりのない文章ですが、宜しければご意見、 ご指摘よろしくお願いします

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