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(無題) 削除/引用 No.606-5 - 2011/07/05 (火) 08:42:14 - Harmonia RIかどうかはともかく、パルスラベルです。 MG132 は、シグマのカタログにJNKの活性化があると書かれているし、そのほかの薬剤もどういう副作用が有るかわからない。 MG132でプロテアソーム分解を抑制して、JNKが転写を抑制していたら、あるいはJNKが転写を活性化したら、話がややこしい。

(無題) 削除/引用 No.606-4 - 2011/07/02 (土) 00:37:02 - おお まずはcycloheximideだとおもいます。ただ100%それでいいかというとそうでもないので、パルスチェイスが王道だといわれてますが、最近では蛍光をふくめいろいろなツールがでてますので、工夫すればRIぬきでパルスチェイスができるかもしれません。mRNA量を無視して良いのですか? 勿論タンパクの分解制御を見るという段階ではそのファクターが関与しないように実験しますけど。

(無題) 削除/引用 No.606-3 - 2011/07/01 (金) 17:17:04 - ンンノ ラジオアイソトープでパルスチェイス。

(無題) 削除/引用 No.606-2 - 2011/07/01 (金) 10:21:00 - TS cycloheximid: タンパク質合成を阻害する MG132: ユビキチン・プロテアソーム系を阻害する などを使ったりしますね。 とりかかりとしてですが。

タンパク発現促進か分解抑制かの確認法 削除/引用 No.606-1 - 2011/07/01 (金) 09:54:07 - ひ ラット大脳皮質初代培養に薬剤を処置し、とあるタンパク発現の増大をウエスタンブロットで確認したとします。 そのタンパク発現増大に関して以下のことを考えました。今回の質問では、mRNAレベルの話は無視して考えたいと思います。 １）実際にはタンパクそのものの発現量が増えたためにおこったのか？ ２）発現量は変化していないが分解が抑制されたことによっておこったものか？ この２つの可能性を検証する最適な方法はどのようなものがありますでしょうか。 ご存じの方いらっしゃったら宜しくお願いします。

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