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(無題) 削除/引用 No.600-5 - 2011/06/30 (木) 14:23:06 - 初心者 ~さん どうもありがとうございます。勉強になります。 vectorや大腸菌は、少し特殊なものを使っております。 なので、少し条件検討が必要なのかもしれません。 とりあえず、大腸菌を変えて行なってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.600-4 - 2011/06/30 (木) 14:10:51 - ~ >vectorを大腸菌で増やす時に、こんなに頻繁に組換えがおこるのでしょうか？ 起きるものは1個も取れないほど組換えが生じることがあります。 取れている10個中1個の元のベクターも、もう1回増やしたら削れるかもしれません。 >もしリコンビネーションが起こってしまうとしたら、何か解決策等ありますか？ 菌株を選んだり、培養温度を下げることで抑制できる場合があります。 ただ、前提として >大腸菌や培養温度などは確認し ということは、そのあたりの条件に問題が無いはずです。 その確認した相手は、そのベクターを増やしたことのある人なのですか？ 経験は無く、これで増やせるはずだと言っているのであれば、間違っている可能性もあります。 また、温度のみで対応しているときには、何故か人によって削れたり削れなかったりすることはありました。 その場合は大腸菌株を変えることで、誰でも増やせるようになりました。 差し支えなければ、ベクター名や使用している大腸菌株名の情報をここにあげれば、もっと情報が得られるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.600-3 - 2011/06/30 (木) 13:28:32 - 初心者 ~さん 早速の返事ありがとうございます。 大腸菌や培養温度などは確認し、30℃で培養を行なっています。 もしリコンビネーションが起こってしまうとしたら、何か解決策等ありますか？ 大腸菌を変えるとかでしょうか。 基本的な質問で大変恐縮なのですが、vectorを大腸菌で増やす時に、こんなに頻繁に組換えがおこるのでしょうか？以前に6 kbp位のplasmidを増やしたときには、こんなことは起こらなかったので、困っています。

(無題) 削除/引用 No.600-2 - 2011/06/30 (木) 13:16:52 - ~ >何か大腸菌内で起こることはあるのでしょうか？ リコンビネーション。 まずは、そのベクターの入手元に、そのベクターの増やし方を確認しましょう。 増やすことの出来る大腸菌株が指定されていたり、培養温度が指定されていることがあります。

大腸菌へのtransformation 削除/引用 No.600-1 - 2011/06/30 (木) 12:36:41 - 初心者 いつも勉強をさせていただいております。 大腸菌へのトランスフォーメーションで、困っています。 単一のvectorをエレクロトポーレションで形質転換し、 出てきたコロニーを調べると、大きさが変わってしまったり、 制限酵素処理で、違うパターンが出たりします。 元のvectorの確率は、10個中1個位しかありません。 形質転換に使ったvectorは単一と考えると、 何か大腸菌内で起こることはあるのでしょうか？ 同じような事が起こって、解決された方がいらっしゃれば、 ご教授いただければと思います。

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