PCRのホットスタートについて質問です。
PCRを行う時、温度が上昇した時点で反応チューブをサーマルサイクラーにセットし、PCRを行っています。
新しく作製したコンストラクトが構築できたかを確認するため、PCRを行い反応させ、電気泳動しました。すると、非特異的なバンドが4本ぐらい出現し、きたないバンドパターンになりました。また、目的のバンドは薄い感じでした。
チューブをセットするさい、間違えてしまい、10秒ほどさしてから、急いでon ice しました。この操作の間に非特異的な反応が起きてしまったのでしょうか?それとも単に反応条件が悪かったのでしょうか?またやり直すつもりですが、on iceしていたチューブを10秒ほどサーマルサイクラーにセットで非特異的に反応するのか気になり、質問させていただきました。 |
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