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(無題) 削除/引用 No.578-2 - 2011/06/27 (月) 09:23:40 - FL > pFastBac1というベクターに目的の遺伝子をライゲーションし、プラスミドを作りましたが、DH10Bacにtransformationしてもコロニーが得られません。 これだけの情報で何が原因かを予想することは至難の業です。 気になった点や、怪しい点などをあげてもらえないと。 それとも全くのノーアイデアであれば、どのように行ったのか全部書き出さないとわかりません。

Bac to Bac 削除/引用 No.578-1 - 2011/06/26 (日) 00:25:24 - hr invitorogen社のBac to Bacという発現システムを利用してタンパク質を発現させようとしています。 pFastBac1というベクターに目的の遺伝子をライゲーションし、プラスミドを作りましたが、DH10Bacにtransformationしてもコロニーが得られません。 実験を行う際に、ポジコンとしてpFastBac1の空ベクターも同時にtoransformationしたのですがこちらについてもコロニーが得られませんでした。 コンピテントcellを新しいものに取り換え、さらに抗生物質の濃度をもう一度確認してプレートを作り再度実験してみましたが、コロニーははえませんでした。 この原因としてどのようなことが考えられるでしょうか。 また、どこを改善すればコロニーが生えるようになるのでしょうか。

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